Ensayo PCR para la detección y diferenciación de Shigella y Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI)

FERNÁNDEZ M. A.; GIUGNO S.; DE URRAZA P. J.

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

ASOCIACIÓN ARGENTINA DE MICROBIOLOGÍA (AAM)

Shigella spp. y ECEI son responsables de una gran proporción de las diarreas bacterianas. Dichos microorganismos son aislados normalmente de materia fecal de pacientes infectados tras cultivos selectivos, y posterior caracterización bioquímica y serológica. Los métodos PCR desarrollados hoy en día no permiten detectar en forma específica y diferencial los microorganismos mencionados anteriormente. Con fin de detectar rápida y específicamente S. flexneri, S. sonnei, S. boydii y ECEI, en este trabajo, se propone una multiplex PCR (mPCR) basada en secuencias de genes codificantes para el antígeno-O (rfc y wzz de S. flexneri 2a y wzz de S. sonnei) y el gen ipaD, necesario para el fenotipo invasor, el cual está codificado en el plásmido de invasividad (pINV); seguida de una PCR basada en la región de replicación del pINV (RRpINV) de S. flexneri 6; la mPCR hace blanco, además, en genes de una isla de patogenicidad (SRL), la cual confiere resistencia a múltiples antibióticos. Se realizaron las PCR utilizando ADN total de 21 aislados hospitalarios de Shigella (incluyendo S. sonnei y distintas serovariedades de S. flexneri y S. boydii), 11 aislados de distintos serogrupos de ECEI y 14 aislados que incluyen ECEH, E. coli ATCC y otras enterobacterias. La mPCR permite obtener 6 perfiles de amplificación diferentes, los cuales se muestran en la tabla Aislados ipaD 752 pb wzz sonnei 647 pb rfc 504 pb wzz flexneri 336 pb S. boydii y S. flexneri 6 + - - - S. flexneri 1, 2 y 3 + - + + S. sonnei + + - + ECEI + - - + ECEH 0145 y 0157, Enterobacter sp. - - - + ECEH 0103, 0111, 0113 y 026, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Providencia sp. y E. coli ATCC - - - - La PCR basada en la RRpINV muestra una amplificación de 900 pb para S. flexneri 6 y S. boydii, y tamaños diferentes para el resto de los serotipos ensayados. Por tal motivo se procedió a secuenciar dicha región de uno de los aislados de S. flexneri 6. La comparación de la secuencia mediante BLAST muestra una homología cercana al 100 % solo con S. boydii. La amplificación de la SRL solo 4 aislados de Shigella presentan amplificación. En conclusión la mPCR permite diferenciar entre ECEI, S. sonnei, S. flexneri y S. boydii, excepto en el caso de S. flexneri 6 que es indistinguible de S. boydii. La PCR basada en RRpINV permite confirmar los resultados de la mPCR y en la mayoría de los casos inferir el serotipo. Por otro lado la amplificación de la SRL aporta información epidemiológicamente útil.