CERELA   05438
CENTRO DE REFERENCIA PARA LACTOBACILOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Bacteriocinas de bacterias lácticas atenuan señales de quorum sensing como estrategia antibiofilmogenica
Autor/es:
PATRICIA CASTELLANO; GRACIELA VIGNOLO; CONSTANZA MELIAN; ROSA TORRES SANCHEZ; RODRIGO GONZALEZ; FRANCO SEGLI; CLARA VERDI
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; XVI Congreso CYTAL® Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2017
Institución organizadora:
CYTAL
Resumen:
Los biofilms son comunidades microbianas complejas y ampliamente distribuidas en la naturaleza. Dado que los biofilms son difíciles de erradicar, la capacidad de las bacterias para formar biopelículas plantea un importante problema en entornos industriales y médicos, siendo fuentes persistentes de contaminación y/o infección. En este entorno se establece un ambiente óptimo para el intercambio de moléculas de señalización o quorum sensing (QS). Este sistema, basado en la síntesis, intercambio y percepción de pequeñas moléculas de señalización (auto-inductores) en presencia de una dada densidad celular permite a las bacterias regular actividades fisiológicas como la formación de biofilm entre otras. Recientemente, se ha demostrado que bacterias lácticas (BL) y/o sus metabolitos fueron capaces de prevenir y controlar biofilms de patógenos. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue investigar el potencial anti-quorum sensing de compuestos antimicrobianos producidas por BL bacteriocinogenicas mediante un bioensayo. Este se basa en la emisión de luminiscencia de la cepa reportera, V. harveyi BB170 a través de un sistema de QS, que responde al auto-inductor 2 (AI-2) producido por V. harveyi BB152. Las sustancias antimicrobianas (bacteriocinas) se obtuvieron a partir de sobrenadantes libres de células de las cepas L. curvatus CRL705 y L. curvatus CRL1532 sometidos a precipitación con sulfato de amonio y cromatografía en fase sólida. Mediante curvas de crecimiento de V. harveyi BB170 en presencia de los antimicrobianos parcialmente purificados se observó que el desarrollo de la cepa reportera no fue afectado por los mismos. En microplacas blancas con fondo plano se inoculó la cepa reportera (1:10000) en combinación con (i) diluciones del sobrenadante libre de células de V. harveyi BB152 (productora de AI-2) + bacteriocinas parcialmente purificadas y a la inversa (ii) diluciones de las bacteriocinas + sobrenadante de V. harveyi BB152. Se incluyeron controles negativos (V. harvery BB170) y positivos (V. harvery BB170 + sobrenadante de V. harveyi BB152). Se incubaron las microplacas con agitación a 30 ºC durante 6 h y se tomaron lecturas cada hora a 490 nm. En presencia de las bacteriocinas producidas por CRL705 y CRL1532 adicionadas por separado (800 UA/ml) más auto-inductor, la luminiscencia emitida por V. harvery BB170 disminuyo en un 92 y 99%, respectivamente comparado con el control positivo. Concentraciones menores de bacteriocinas provocaron que la emisión de luminiscencia aumentara sin embargo esta siempre fue menor a la del control positivo. Esto pone de manifiesto el carácter inhibidor del sistema QS de los antimicrobianos ensayados. Cuando se mantuvo constante la concentración de los antimicrobianos en combinación con diluciones del auto-inductor la luminiscencia disminuyo evidenciando que las bacteriocinas carecen de un efecto inductor. En este trabajo se demuestra que las bacteriocinas producidas por L. curvatus CRL705 y CRL1532 poseen un efecto inhibidor del sistema de QS de V. harveyi BB170 y que las mismas no son inductores siendo esto el primer paso para su posible aplicación como compuestos anti-QS a fin de evitar el desarrollo de microorganismos biofilmogenicos perjudiciales para la industria y medicina.