DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE GALACTOOLIGOSACÁRIDOS PREBIÓTICOS SINTETIZADOS POR PROPIONIBACTERIAS.

JUAREZ LUZ; PALACIOS, JORGE; MONTILLA, ANTONIA; FARA, AGUSTINA; ZÁRATE, GABRIELA

Filial Cuyo

Jornada; XX JORNADAS ARGENTINAS DE MICROBIOLOGÍA; 2022

Asociación Argentina de Microbiología

Los prebióticos fueron redefinidos por la Asociación Científica Internacional de Probióticos y Prebióticos (ISAAP) en 2017, como sustratos utilizados de manera selectiva por los microorganismos del huésped, confiriéndole beneficios para su salud. Los prebióticos más reconocidos son los carbohidratos, entre ellos, los galactooligosacáridos (GOS). Uno de los requisitos para que un compuesto sea considerado prebiótico es su resistencia a la digestión gastrointestinal. La mayoría de los estudios se han centrado en la síntesis, estructura y propiedades tecnológicas de los GOS, pero pocos han evaluado sus modificaciones durante su paso por el tracto gastrointestinal superior. En el presente estudio, evaluamos la digestibilidad de GOS sintetizados por Acidipropionibacterium acidipropionici LET120, mediante el uso vesículas de membrana del borde en cepillo (BBMV) del epitelio de cerdo como modelo de mucosa intestinal de mamífero. Las BBMV se obtuvieron del intestino delgado de cerdos jóvenes, de 10 meses de edad. La mucosa intestinal se homogeneizó con buffer fosfato de sodio con manitol 50 mM, y centrifugó a 3000 x g durante 30´. El sobrenadante se ultra-centrifugó durante 40´y el pellet resultante se liofilizó y mantuvo a -80 °C hasta su uso. La digestión de los oligosacáridos se realizó mezclando BBMV (10 mg mL-1) con 0,2 mg mL-1 de LET120-GOS. Se incubó en agitación constante, a 37 °C y se tomaron alícuotas a las 0, 1, 2, 3, y 5 h. La cuantificación de oligosacáridos se realizó por cromatografía de gases con detector de ionización de llama (GC-FID). En trabajos anteriores se logró sintetizar y semi-purificar LET120-GOS usando β-galactosidasa de A. acidipropionici LET120 a partir de lactosa, obteniéndose una mezcla compuesta por 57% de GOS, con mayor proporción de oligosacáridos con enlaces β(1→3), seguida por β(1→6) y β(1→4). Luego de la reacción con BBMV, la mezcla de oligosacáridos sintetizados por las propionibacterias se degradó parcialmente. La mayor hidrólisis se observó a las 5 h de digestión, en donde se llegó a degradar el 48% de los LET120-GOS con una tasa de hidrólisis de 10. La estructura y composición de los oligosacáridos influyó en la hidrólisis. Los compuestos con enlace β(1→3) mostraron una menor resistencia a las enzimas digestivas de cerdo en comparación con los oligosacáridos con enlaces β(1→4) y β(1→6). A las 2 h, tiempo promedio de permanencia fisiológica en el intestino, las enzimas de BBMV lograron digerir 45% del trisacárido 3´Galactosil-lactosa. Sin embargo, al finalizar la hidrólisis, se observó un remanente de 60% de 6´Galactosil-Lactosa y 70 % de 4´Galactosil-lactosa que estarían disponibles para ser fermentados en el colon. Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que el uso de enzimas intestinales de mamíferos, como intestino delgado de cerdo es una estrategia útil para evaluar la digestibilidad de oligosacáridos potencialmente prebióticos. Son necesarias mayores investigaciones sobre la digestibilidad de compuestos que pretenden usarse como ingredientes funcionales.