MICROTÉCNICAS PARA CONTROL DE VIABILIDAD CELULAR EN CEPAS DE YOGUR

MARTOS, GLADYS IRMA; ARTIGAS, MARÍA JOSEFINA; FORNAGUERA, MARÍA JOSÉ; PEREZ CHAIA, ADRIANA

VIRTUAL

Jornada; XIX JORNADAS ARGENTINAS DE MICROBIOLOGÍA; 2021

AAM

Cepas de Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus thermophilus son los componentes de cultivos iniciadores para la fermentación del yogur, por lo cual se someten a controles de calidad rigurosos; los microorganismos congelados, preparados para la siembra directa deben mantener la viabilidad, entre otras propiedades. La siembra por extensión en placa en medios sólidos usando diluciones sucesivas es uno de los métodos más empleados para la determinación de viabilidad, a pesar de la cantidad de material y el tiempo necesario. El objetivo de este trabajo fue utilizar dos microtécnicas como métodos alternativos al método de extensión en placa (EP). Se trabajó con cultivos concentrados congelados (-20°C) de L. delbrueckii ssp. bulgaricus CRL 447, 451, 453, 466 y 494 y de St. thermophilus CRL 412, 417, 638, 807 y 808 de la Colección de Cultivos CRL, CERELA. Se prepararon diluciones sucesivas (10-1 hasta 10-6) de cada cultivo en solución fisiológica (NaCl 0,85%). En la técnica de Trazas de la Dilución (TD) se sembraron 10 µL próximos al borde, inclinando la placa un ángulo de 45° - 90° para que la suspensión celular se deslice por la superficie del agar hasta el lado opuesto de la placa. Para la técnica de Microgota (MG) se dividió en tres partes la placa y se sembró una gota de 20 µL por duplicado en cada área, usando también 3 diluciones por placa. Como control se usó el método de Extensión en Placa (EP), sembrando 100 µL de cada dilución por placa, diseminando con espátula de drigalsky. En todos los casos, se emplearon los medios agarizados, MRS y LAPT glucosa-lactosa para los lactobacilos y estreptococos, respectivamente. Después de cada siembra, las placas se dejaron secar 10 minutos y se incubaron a 37°C, 48 horas. Las pruebas se realizaron por duplicado. Los resultados se expresaron como Log de UFC/ml. La prueba t de student se utilizó para la comparación estadística de los datos. Los resultados obtenidos no mostraron diferencias significativas (P>0,05) cuando se compararon los recuentos obtenidos en las técnicas TD y MG con EP. La técnica de MG permite realizar duplicados en una misma placa y el recuento se facilita sólo cuando la dilución y el tamaño de las colonias son adecuadas. El tiempo operativo para las microtécnicas fue de 5 y 7 min para TD y MG, respectivamente, a diferencia de los 15 min empleados en EP. Ambas microtécnicas permitieron obtener resultados homogéneos y confiables de viabilidad celular disminuyendo costos y reduciendo el tiempo empleado. Las microtécnicas ensayadas constituyen una buena alternativa para reemplazar el método tradicional.