Caracterización bioquímica de una alfa-galactosidasa recombinante proveniente de Lactobacillus fermentum CRL 722

LEBLANC, J.G.; CARRERA-SILVA, E.A.; SESMA, F.; SAVOY DE GIORI, G.

Tafí del Valle, Tucumán

Jornada; XXII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2005

Asociación de Biología de Tucumán

Estaquiosa y rafinosa, alfa-galactooligosacáridos (alfa-GOS) presentes en productos de soja, frecuentemente resisten la digestión y la absorción en el intestino delgado ya que los animales monogástricos (incluyendo los humanos) no poseen la enzima alfa-galactosidasa (alfa-Gal) necesaria para hidrolizarlos. Como consecuencia, los alfa-GOS alcanzan el intestino grueso donde son fermentados por la microbiota intestinal liberando gases (CO2, H2 y CH4) los cuales pueden provocar efectos fisiológicos indeseables (hinchazón abdominal, flatulencias, y nauseas) en individuos sensibles. Microorganismos con actividad alfa-Gal constituyen una alternativa promisoria para eliminar los alfa-GOS presentes en soja, pero es difícil encontrar cepas que poseen actividad alfa-Gal y que sean inocuas para su empleo en alimentos. La importancia de la caracterización genética y bioquímica de alfa-Gal radica en la posibilidad de introducirla en bacterias lácticas que colonizan el intestino delgado, para su uso como probiótico.  El objetivo de este estudio fue caracterizar desde punto de vista bioquímico una alfa-Gal recombinante, proveniente de Lb. fermentum CRL722 y expresada en E. coli BL21. Se logró identificar, secuenciar y clonar el gen melA proveniente de Lb. fermentum CRL 722 en el vector de expresión pET28. El vector conteniendo el inserto fue introducido en E. coli BL21. La proteína recombinante fue purificada, caracterizada bioquímicamente y comparada a la proteína nativa producida por Lb. fermentum CRL722.  Ambas proteínas fueron activas en un amplio rango de pH y temperaturas, características interesantes desde el punto de vista industrial ya que la actividad se mantiene a temperaturas superiores a 50ºC.  El gen clonado debería ser expresado en otros microorganismos los cuales mediante fermentaciones usando sustrato soja sean capaces de degradar los alfa-GOS. Asimismo, el desarrollo de un microorganismo probiótico con capacidad de degradar los alfa-GOS in situ resulta una propuesta atractiva y de aplicación biotecnológica.