UTILIZACIÓN DE LC-MS/MS DE ALTA RESOLUCIÓN PARA LA IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS.

LINGUA M.S.; BARONI M.V.; WUNDERLIN D.

Los Cocos

Congreso; Primer Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2012

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

 En los últimos años, los avances en las técnicas analíticas de separación de compuestos y la espectrometría de masas han tenido un impacto cada vez mayor en el estudio de las biomoléculas permitiendo la dilucidación por ejemplo de biomarcadores de enfermedades. En este sentido, la espectrometría de masas en tandem (MS/MS), acoplada a la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), constituyen una de las herramientas analíticas más poderosas para el estudio de las proteínas, permitiendo una identificación rápida y sensible de un pool de estas moléculas. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un método HPLC-ESI-MS/MS que permita la identificación de proteínas a partir de los espectros MS/MS. Finalizado el análisis bioinformático mediante MASCOT, la probabilidad basada en el puntaje de Mowse, arrojó un valor de 48 como puntaje límite a partir del cual se asegura en un 95% la certeza de los resultados obtenidos. Dicho análisis resultó en ABS como la única proteína con el mayor puntaje (912) el cual demostró que el análisis de identificación fue estadísticamente significativo (p<0,05). Un total de 30 péptidos fueron identificados por comparación de los espectros de MS/MS,  siendo 7 los péptidos identificados con significancia estadística. Estos 30 péptidos identificados permitieron cubrir en un 54% la secuencia completa de la proteína. Nuestros resultados demuestran que la información derivada del análisis bioinformático requiere de un detallado estudio para la correcta comprensión de los resultados. Por otro lado, se evidencia la importancia de la simple adquisición de espectros MS/MS de alta resolución para la identificación de proteínas; la obtención de dichos espectros, sin previo análisis, constituye una fuente de datos fundamental para la identificación de proteínas mediante comparación con secuencias primarias de las mismas presentes en bases de datos. Figura 2: Secuencia de aminoácidos en ABS. Los aminoácidos en rojo corresponden a los identificados por datos experimentales. Figura 1: Mascot Score Histogram. Probabilidad basada en el puntaje de Mowse en función del número de proteínas.