Expresión de Componentes de la Subfamilia del Factor Transformante del Crecimiento-beta Luego de la Aplicación de Panax ginseng en Glándula Mamaria Bovina

PUJATO, SILVINA; CADOCHE, MONICA; DALLARD, BIBIANA

Rosario

Jornada; XIII Jornadas FCV-UNR; 2012

Universidad nacinal de Rosario

  Durante el periodo de secado se produce el proceso de remodelación mamaria, que incluye la regresión (apoptosis), proliferación y diferenciación de las células mamarias. La existencia de un periodo no lactante previo al parto, comúnmente denominado periodo seco, es imprescindible para la producción óptima de leche en la lactancia siguiente Durante el periodo de secado se originan infecciones intramamarias (IIM) que pueden reducir la producción láctea hasta en un 30% comparando con cuartos mamarios no infectados. Tradicionalmente, el control de las IIM se realiza con antibióticos de acción prolongada. Las limitantes de esta práctica, debido a la generación de residuos en leche y resistencia bacteriana entre otras, han motivado la búsqueda de nuevas alternativas de control.  En este sentido, en nuestro laboratorio, hemos contemplado la utilización de un extracto de Panax ginseng (PG) al momento del secado como una alternativa a los métodos tradicionales. Los resultados obtenidos de estos estudios han demostrado que la inoculación intramamaria (IM) de PG, estimula de manera significativa la expresión de citoquinas proinflamatorias en leche y en tejido mamario durante la primera semana de la involución, comportándose como un estimulante de las defensas innatas del huésped1. Por otra parte, hemos comprobado que acelera el proceso de involución mamaria a través de una intensa remodelación del tejido, aumentando en forma significativa la apoptosis, sin alterar la proliferación celular2. La subfamilia del Factor Transformante del Crecimiento-beta (TGF-β) está conformada por citoquinas multifuncionales que regulan un amplio espectro de actividades biológicas, que incluyen: crecimiento y diferenciación celular, apoptosis, migración celular, funciones inmunes, angiogénesis y producción de matriz extracelular3. Los mamíferos expresan tres isoformas altamente homólogas de TGF-β (TGF-β1, 2 y 3).  Por los antecedentes citados, en el presente trabajo nos proponemos como objetivo general identificar y cuantificar las isoformas del TGF-β en glándula mamaria bovina y detectar posibles alteraciones en su expresión  luego de la aplicación de extracto de PG al momento del secado. Se utilizaron 6 vacas Holstein no preñadas en la etapa final de la lactancia. La  unidad  experimental  fue  el  cuarto  mamario.  Del  total  de  cuartos disponibles, 8 fueron inoculados con 10 ml de una solución de extracto de PG (3 mg del extracto seco/ml), 8 con 10 ml de placebo (solución fisiológica) y 8 fueron mantenidos como controles (libres de inoculación). Los animales fueron secados luego de la inoculación y se sacrificaron a los 7 días. Se obtuvieron muestras de tejido de tres zonas diferentes de la glándula mamaria, las cuales se procesaron mediante técnicas histológicas de rutina hasta la obtención del taco de parafina. Cortes de 4 μm de espesor fueron sometidos a técnicas de inmunohistoquímica (IHQ) indirecta, utilizando anticuerpos específicos para la detección de TGF-β1, TGF-β2, y TGF-β3. La semicuantificación de la expresión de dichas proteínas se realizó mediante análisis digital de imágenes utilizando el programa Image Pro-Plus 3.0.1®. Las diferencias entre los tratamientos fueron analizadas mediante el test no paramétrico Kruskal-Wallis, seguido de Bonferroni como test de comparaciones múltiples utilizando el software Statgraphics Plus 5.1. La expresión de TGF-β1 y TGF-β3 se asoció fundamentalmente a estructuras del parénquima mamario, observándose una reacción intensa a la marcación en el epitelio que reviste alvéolos y conductos mamarios. Células del estroma como fibroblastos, macrófagos y células endoteliales de los vasos sanguíneos mostraron marcación positiva en el citoplasma. En cuartos mamarios inoculados con PG a los 7 días del secado se observó un aumento significativo en los porcentajes de área inmunomarcada para TGF-β1 y TGF-β3 en comparación con los cuartos tratados con placebo y los cuartos que no recibieron ningún tratamiento (p<0.05). La inmunomarcación para TGF-β2 fue negativa tanto en los cuartos tratados con PG como en los cuartos inoculados con placebo y en los cuartos controles. Trabajos previos han demostrado que TGF-β1 y TGF-β3 son agentes apoptogénicos que cumplen un rol importante en la inhibición de la proliferación de las células epiteliales mamarias. Por lo tanto, los resultados aquí obtenidos sugieren que el PG actuaría como estimulante de la remodelación mamaria durante la involución temprana. Por otra parte, la expresión TGF-β2 fue negativa tanto en los tratados con PG como en los que no recibieron tratamiento, esto podría estar relacionado con el período de la involución aquí evaluado (7 días post secado). Posiblemente este factor de crecimiento no ejercería un rol esencial durante la involución temprana en la glándula mamaria bovina. Sumado a este resultado, publicaciones previas han reportado una menor participación del TGF-β2 en el proceso de remodelación mamaria durante la involución.