Aislamiento de fagos específicos contra Klebsiella pneumoniae: un enfoque prometedor para combatir la resistencia a los antibióticos

PUJATO, S.; MERCANTI, D.; QUIBERONI, A.; PUJATO, N.; RADISIC, M.; FERNANDEZ, A.; BRIGGILER MARCÓ, M.

Congreso; Congreso de Infectología 2023 - XXI Congreso API - XXIII Congreso SADI.; 2023

La resistencia a los antibióticos es un desafío creciente en la salud pública a nivel mundial. En particular, las infecciones causadas por la bacteria Klebsiella pneumoniae se han vuelto cada vez más difíciles de tratar debido a su capacidad de desarrollar resistencia a múltiples antibióticos. En septiembre de 2022, se aisló en Argentina una cepa de Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasas. Al realizar la determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y/o la prueba de difusión por discos, se confirmó la resistencia fenotípica a penicilinas, cefalosporinas, monobactames, carbapenemes, aminoglucósidos, fosfomicina, lipopéptidos, tetraciclinas/glicilciclinas, quinolonas, rifamicinas, inhibidores de folato, fenicoles y nitrofuranos disponibles en Argentina. Debido a su alta resistencia, se consideró el uso de bacteriófagos como una alternativa para su tratamiento.El objetivo de este estudio fue aislar, caracterizar y secuenciar bacteriófagos capaces de lisar cepas de Klebsiella pneumoniae resistentes a antibióticos, y seleccionar aquellos que no posean genes de resistencia a antibióticos ni genes asociados a la lisogenia para su uso en fagoterapia.Se recolectaron muestras de agua residual de frigoríficos y aguas cloacales cercanas a un hospital para aislar los bacteriófagos de Klebsiella pneumoniae. Los fagos se propagaron en caldo LB-CaMg. Se extrajo el ADN con fenol-cloroformo y se analizó su patrón de restricción utilizando software BioNumerics™ V6. La secuenciación del ADN se realizó con el kit ADN Nextera XT (Illumina). Las secuencias se ensamblaron y se evaluó su calidad con el software FastQ. Se confirmó el ensamblaje del genoma mediante PCR y se predijeron los genes utilizando GeneMark y ORF Finder. Se compararon las secuencias con otros genomas de fagos mediante NCBI blastn. Se logró aislar un total de 8 fagos altamente específicos para la cepa panresistente de Klebsiella pneumoniae. Todos demostraron tener capacidad de lisar la cepa en medio líquido en un tiempo de 2 horas, obteniendo un título de 10*10 UFP/mL. Cuando se realizaron los cortes con enzimas, se observaron 5 patrones diferentes. El análisis de secuenciación reveló que los fagos seleccionados no poseían genes de resistencia a antibióticos ni genes asociados a la lisogenia.Los resultados obtenidos indican que los bacteriófagos específicos aislados en este estudio podrían ser una alternativa prometedora como adyuvantes a la terapia antibiótica en el tratamiento de infecciones causadas por la cepa de Klebsiella pneumoniae resistente a antibióticos. La capacidad de los fagos para destruir selectivamente las bacterias objetivo, sin afectar a las células humanas sanas, y su capacidad de adaptación a las bacterias en constante evolución los convierten en una opción potencialmente efectiva contra las cepas resistentes.