Aislamiento y caracterización preliminar de dos fagos temperados de una cepa comercial de Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis

SUÁREZ, VIVIANA B.; QUIBERONI, A.; BINETTI, A. G.; GIRAFFA, G.; REINHEIMER, J. A.

Tucumán

Simposio; II Simposio Internacional de Bacterias Lácticas; 2006

CERELA

     La industria argentina al igual que la mundial, sufre serios problemas tecnológicos y económicos causados por las infecciones fágicas. En los últimos años ha asistido a una verdadera revolución en la formulación microbiológica de las leches fermentadas, debido al agregado de otras bacterias aisladas del intestino humano (probióticos), principalmente cepas de L. casei/paracasei. Usualmente, los análisis de fagos a partir de muestras industriales se realizan por métodos microbiológicos estandarizados, cuya principal desventaja es la necesidad de encontrar una cepa sensible a los fagos presentes así como la gran demanda de tiempo, una de las variables más críticas en el momento de tomar las decisiones adecuadas en cualquier industria. La PCR es una técnica extremadamente útil que, frente a la creciente necesidad de monitoreo de fagos, ya ha sido adaptada a la detección de fagos de diversas bacterias lácticas. Teniendo en cuenta estos antecedentes se diseñó, un sistema de detección fagos de L. casei/paracasei por PCR, basado en una de las regiones altamente conservadas del módulo de replicación de los fagos de L. casei A2 y AT3. A partir del alineamiento de sus genomas, se diseñó un par de oligonucleótidos que permitió amplificar, a partir de la totalidad de muestras analizadas (n=9), fragmentos del tamaño esperado (590 bp), utilizando ADN fágico como templado de reacción. Las muestras incluyeron fagos específicos de L. casei/paracasei, aislados de procesos industriales así como fagos de colecciones internacionales. Para comprobar la universalidad del método, se secuenciaron los amplicones, se alinearon sus secuencias y se diseñaron nuevos oligonuclétidos internos. La totalidad de los bacteriofagos estudiados dio una señal de PCR de 356 bp, indicando que el sistema ofrece una alta especificidad y sensibilidad para la detección de fagos de L. casei/paracasei. Además, una de las principales ventajas de esta técnica es que elimina la necesidad de disponer de cepas sensibles a los fagos presentes, razón por la cual, en determinados casos, los métodos tradicionales de detección arrojan resultados falsos. La industria argentina al igual que la mundial, sufre serios problemas tecnológicos y económicos causados por las infecciones fágicas. En los últimos años ha asistido a una verdadera revolución en la formulación microbiológica de las leches fermentadas, debido al agregado de otras bacterias aisladas del intestino humano (probióticos), principalmente cepas de L. casei/paracasei. Usualmente, los análisis de fagos a partir de muestras industriales se realizan por métodos microbiológicos estandarizados, cuya principal desventaja es la necesidad de encontrar una cepa sensible a los fagos presentes así como la gran demanda de tiempo, una de las variables más críticas en el momento de tomar las decisiones adecuadas en cualquier industria. La PCR es una técnica extremadamente útil que, frente a la creciente necesidad de monitoreo de fagos, ya ha sido adaptada a la detección de fagos de diversas bacterias lácticas. Teniendo en cuenta estos antecedentes se diseñó, un sistema de detección fagos de L. casei/paracasei por PCR, basado en una de las regiones altamente conservadas del módulo de replicación de los fagos de L. casei A2 y AT3. A partir del alineamiento de sus genomas, se diseñó un par de oligonucleótidos que permitió amplificar, a partir de la totalidad de muestras analizadas (n=9), fragmentos del tamaño esperado (590 bp), utilizando ADN fágico como templado de reacción. Las muestras incluyeron fagos específicos de L. casei/paracasei, aislados de procesos industriales así como fagos de colecciones internacionales. Para comprobar la universalidad del método, se secuenciaron los amplicones, se alinearon sus secuencias y se diseñaron nuevos oligonuclétidos internos. La totalidad de los bacteriofagos estudiados dio una señal de PCR de 356 bp, indicando que el sistema ofrece una alta especificidad y sensibilidad para la detección de fagos de L. casei/paracasei. Además, una de las principales ventajas de esta técnica es que elimina la necesidad de disponer de cepas sensibles a los fagos presentes, razón por la cual, en determinados casos, los métodos tradicionales de detección arrojan resultados falsos.