Síntesis enzimática de un nuevo péptido antihipertensivo, utilizando asclepaína como catalizador

ORIGONE ANABELLA; CONSTANZA LIGGIERI; BRUNO MARIELA A.; ILLANES ANDRÉS; BARBERIS SONIA

VALPARAÍSO

Congreso; Jornada de Biocatálisis; 2017

En la actualidad, los péptidos bioactivos se encuentran en la vanguardia biotecnológica porque pueden sustituir a los fármacos químicos y aditivos alimentarios para ser utilizados como nutracéuticos, y así mitigar o prevenir enfermedades evitando los efectos secundarios que presentan la mayoría de los fármacos[1,2].El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de asclepaína, fitoproteasa proveniente de los tallos y pecíolos de Asclepias curassavica L., como catalizador de .la síntesis enzimática de N- -[Carbobenciloxi]-Tyr-Gln-Gln (Z-YQQ) en un sistema bifásico acuoso-orgánico formado poracetato de etilo al 50% (v/v) y buffer Tris-HCl 0,1 M pH 8.Los sustratos para la reacción de síntesis fueron seleccionados en función de las preferenciasexpresadas por asclepaína por diferentes sustratos N- - [Carbobenciloxi] -aminoácido-pnitrofeniléster.ZY-pNO y H-Gln-OH fueron empleados como donador de acilo y nucleófilo,respectivamente. La reacción se llevó a cabo a 40º C y 200 rpm en un agitador orbital GFL (Modelo3031, Alemania). Para seguir el curso de la reacción, se tomaron periódicamente muestras y seanalizaron por RP-HPLC durante 24 h. La estructura del producto se dilucidó medianteespectrometría de masas (EM).La determinación de actividad antihipertensiva in vitro fue llevada a cabo utilizando el péptidoFRET (Abz-FRK-(Dnp)P-OH) como sustrato de la enzima convertidora de angiotensina (ECA[3].La actividad enzimática frente a Z-YQQ fue monitoreada a 37° C durante 590 seg en un lector demicroplacas (Tekan, Infinite M200 PRO) automático con controlador de temperatura. El aumentode la fluorescencia fue med ex em = 420 nm.El producto de síntesis fue obtenido luego de 5 min de reacción a un tR= 9,4 min, permaneció enla fase acuosa y se mantuvo estable hasta las 3 h de reacción, alcanzando un grado de conversiónde sustrato en producto de 100 %. El espectro de masa del producto reveló un ión molecular dem/z: 568, correspondiente al péptido N- - [Carbobenciloxi] -Tyr-Gln-Gln (Z-YQQ).Finalmente, se determinó la IC50 del péptido mencionado obteniéndose un valor de 15 mM, quecomparado con captopril (IC50 =17,4 nM), uno de los principales fármacos inhibidores de la ECA,posee una capacidad inhibitoria menor. No obstante, los resultados obtenidos sugieren queasclepaína es un promisorio biocatalizador para la síntesis de péptidos bioactivos. Este trabajocontribuye al estudio de la biodiversidad de la flora autóctona sudamericana, como fuente deenzimas proteolíticas extremófilas.