Aislamiento y caracterización de tres fitopeptidasas cisteínicas a partir de frutos de Bromelia hieronymi Mez (Bromeliaceae)

BRUNO, A.,; TREJO, S.; S.BRONSOMS; AVILÉS, X,; CAFFINI N.; LÓPEZ, L.M.I

Elche

Congreso; XXIX Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular; 2006

SEBBM

A partir de frutos inmaduros de B. hieronymi, una especie que crece en el norte de Argentina, se aislaron tres fitopeptidasas que difieren en sus propiedades bioquímicas y fisicoquímicas. Las enzimas fueron purificadas por precipitación acetónica fraccionada y cromatografía de intercambio iónico (FPLC). Las peptidasas aisladas son activadas por cisteína e inhibidas completamente por E-64 y acido iodoacético, demostrando que pertenecen al grupo de las proteasas cisteínicas. La homogeneidad de las mismas fue confirmada por espectrometría de masas (MALDI-TOF), las masas moleculares para hieronymaína I, II y III fueron 24.066, 23.411 y 23.712 Da, respectivamente. El isoelectroenfoque-zimograma mostró que poseen muy distintos valroes de pI: >9,3; 7,6-8,3 y 5,9-6,4, respectivamente. Cada enzima presenta parámetros cinéticos específicos frente a sustratos del tipo CBZ?L?aminoácido p?nitrofenil ésteres y Z-Phe-Arg-pNA. Las secuencias N-terminales de hieronymaína I, II y III (ALPESIDWRAKGAVTEVKRQDG, AVPQSIDWRVYGA y AVPQSIDWRRYGAVTTSRNQG), determinadas por el método de Edman, muestran un alto grado de identidad con otras peptidasas cisteínicas pertenecientes a la familia de las Bromeliaceae. El trabajo ha recibido apoyo de AECI, CIC, ANPCyT y CYTED. M.A.B. es becaria UNLP, L.M.I.L. es investigadora CONICET y N.O.C. es investigador CICPBA