Endopeptidasas de frutos de Bromelia hieronymi Mez (Bromeliaceae): nueva estrategia de aislamiento y purificación

BRUNO, MARIELA A. .; PARDO, MARCELO F. , MERCERAT, JULIO R. ,; MERCERAT, JULIO R. ,; CAFFINI, NÉSTOR O.; LÓPEZ, LAURA M. I.

Isla Margarita, Venezuela

Congreso; X Congreso Italo Latinoamericano de Etnomedicina,; 2001

Sociedad Italo-Latino Americana de Etnomedicina (SILAE)

Se ha desarrollado una nueva estrategia para aislar y purificar las endopeptidasas presentes en frutos de Bromelia hieronymi Mez (Bromeliaceae) que habían sido previamente estudiadas en nuestro laboratorio. El extracto crudo (sobrenadante de extractivos de frutos triturados en presencia de buffer fosfatos 0,1 M de pH 6 conteniendo EDTA y cisteína 5 mM) fue sometido a precipitación fraccionada con acetona y etanol. Sobre el extracto crudo y los precipitados acetónico (PAR) y etanólico (PER) redisueltos se determinó el contenido de proteínas, carbohidratos y actividad caseinolítica. El esquema de purificación fue monitoreado por SDS-PAGE e IEF-zimograma. Si bien el tratamiento etanólico elimina mayor cantidad de carbohidratos, la recuperación de proteínas y de actividad es mayor en el caso del tratamiento acetónico. El IEF-zimograma muestra 6 bandas proteicas, 4 de las cuales son activas. La masa molecular (SDS-PAGE) de las distintas fracciones proteicas es del mismo orden (alrededor de 25 kDa). Los datos obtenidos coinciden con los estudios preliminares y permiten definir la estrategia que se llevará a cabo para purificar por FPLC y luego caracterizar las especies moleculares proteolíticamente activas.