Estudio de la inactivación de Saccharomyces cerevisiae por radiación UV-C mediante técnicas moleculares

CHAR, C D; GUERRERO, S N; MARTINEZ, C; SALINAS, F; ALZAMORA, STELLA MARIS; GANGA, M A

Concordia (ER)

Congreso; XII Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2009

AATA

La radiación ultravioleta de onda corta (UV-C) se ha aplicado exitosamente a la desinfección de agua, incluso ha reemplazado a los procesos de clorinación convencionales en algunos países. El objetivo de este trabajo fue estudiar y modelar el efecto de la luz UV-C sobre S. cerevisiae L1528 en un sistema modelo (agua de peptona acidificada pH 3,5), jugo de manzana (pH: 3,5; 12 ºBrix) y jugo de naranja (pH: 3,6; 9 ºBrix).  Adicionalmente, se evaluaron las alteraciones provocadas sobre el ADN mediante técnicas de biología molecular. La radiación UV-C se aplicó utilizando una lámpara de mercurio de baja presión (30W) con emisión a 253,7 nm. La misma se suspendió en el interior de un tubo de vidrio, dejando un espacio anular de 3,5 mm para el flujo del líquido a tratar. Las dosis (0; 5,0; 9,6; 14,1 y 18,7 kJ/m2) aplicadas se obtuvieron variando el tiempo de exposición (0, 5, 10, 15, 20 min) y se determinaron químicamente mediante el par actinométrico ioduro/iodato. Cada sistema se termostatizó a 40°C en un vaso de doble pared, se inoculó (5 mL) y se recirculó a 240 mL/min con una bomba peristáltica. A intervalos de tiempo regulares se tomaron alícuotas determinándose el número de sobrevivientes por recuento en placa. La cinética de inactivación se analizó aplicando el modelo de distribución de frecuencias de resistencias tipo Weibull. Los efectos del daño producido por la radiación UV-C sobre el genoma de S. cerevisiae se determinaron mediante electroforesis de campos pulsados (PFGE), Random Amplified Polymorphic DNA-PCR (RAPD-PCR) y análisis interdelta fingerprinting. La eficiencia de la radiación UV-C fue muy dependiente de la naturaleza del sistema. En los sistemas modelo y jugo de manzana la efectividad fue notoriamente mayor (> 5,5 y ≅ 4 ciclos log de reducción) que en jugo de naranja durante el tratamiento por 20 min. Este hecho que se manifestó en los elevados valores de moda, media y varianza de las distribuciones de Weibull correspondientes al jugo cítrico. Los estudios moleculares permitieron observar algunos patrones de bandeo diferentes entre las colonias control (sin tratar) y las sometidas a tratamientos UV-C evidenciando alteraciones en el ADN relacionadas con retrotransposones Ty2.S. cerevisiae L1528 en un sistema modelo (agua de peptona acidificada pH 3,5), jugo de manzana (pH: 3,5; 12 ºBrix) y jugo de naranja (pH: 3,6; 9 ºBrix).  Adicionalmente, se evaluaron las alteraciones provocadas sobre el ADN mediante técnicas de biología molecular. La radiación UV-C se aplicó utilizando una lámpara de mercurio de baja presión (30W) con emisión a 253,7 nm. La misma se suspendió en el interior de un tubo de vidrio, dejando un espacio anular de 3,5 mm para el flujo del líquido a tratar. Las dosis (0; 5,0; 9,6; 14,1 y 18,7 kJ/m2) aplicadas se obtuvieron variando el tiempo de exposición (0, 5, 10, 15, 20 min) y se determinaron químicamente mediante el par actinométrico ioduro/iodato. Cada sistema se termostatizó a 40°C en un vaso de doble pared, se inoculó (5 mL) y se recirculó a 240 mL/min con una bomba peristáltica. A intervalos de tiempo regulares se tomaron alícuotas determinándose el número de sobrevivientes por recuento en placa. La cinética de inactivación se analizó aplicando el modelo de distribución de frecuencias de resistencias tipo Weibull. Los efectos del daño producido por la radiación UV-C sobre el genoma de S. cerevisiae se determinaron mediante electroforesis de campos pulsados (PFGE), Random Amplified Polymorphic DNA-PCR (RAPD-PCR) y análisis interdelta fingerprinting. La eficiencia de la radiación UV-C fue muy dependiente de la naturaleza del sistema. En los sistemas modelo y jugo de manzana la efectividad fue notoriamente mayor (> 5,5 y ≅ 4 ciclos log de reducción) que en jugo de naranja durante el tratamiento por 20 min. Este hecho que se manifestó en los elevados valores de moda, media y varianza de las distribuciones de Weibull correspondientes al jugo cítrico. Los estudios moleculares permitieron observar algunos patrones de bandeo diferentes entre las colonias control (sin tratar) y las sometidas a tratamientos UV-C evidenciando alteraciones en el ADN relacionadas con retrotransposones Ty2.