Efecto del ozono en fase acuosa sobre conidios de Botrytis cinerea: análisis de las cinéticas de inactivación y del estado fisiológico a nivel celular

ANGELA ROCÍO ROMERO BERNAL; STELLA MARIS ALZAMORA; HECTOR L. GONZALEZ; SILVIA RAFFELLINI; PAULA L. GOMEZ

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos y y XXI Congreso Latinoamericano y del Caribe de Ciencia y Tecnología de Alimentos CYTAL-ALACCTA; 2019

AATA y ALACCTA

El fitopatógeno Botrytis cinerea infecta diversos frutos de regiones templadas, ocasionando importantes pérdidas económicas. Su control mediante fungicidas sintéticos se cuestiona por los riesgos potenciales de sus residuos sobre la salud, además del desarrollo de resistencia microbiana. El lavado con agua ozonizada es una técnica alternativa para la descontaminación de los frutos en la post-cosecha.El objetivo de este trabajo fue estudiar la cinética de inactivación de conidios de B. cinérea en suspensión expuestos a tratamientos con ozono en una columna de burbujeo, y analizar mediante citometría de flujo (CF) los daños inducidos a nivel poblacional y celular.Se trataron suspensiones de conidios de B. cinérea BAFC 3003 de diferentes concentraciones (103 ? 105 conidios/mL). La ozonización se realizó en un equipo constituido por un generador de ozono por descarga corona a partir de oxígeno y una columna de burbujeo con difusor incluido. Los tratamientos se realizaron a 20  1 C tratando 0,5 L de suspensión de células con diferentes concentraciones de ozono disuelto (2,5  0,4 y 4,5  0,2 mg O3/L) durante distintos tiempos de exposición (1 ? 16 min). Los tratamientos se realizaron por duplicado. Las suspensiones ozonizadas y las no tratadas (control) se sometieron a recuentos en placa (agar extracto de malta, 5 días de incubación a 25 ± 1 ºC). Las curvas semilogarítmicas de supervivencia se modelaron con una distribución tipo Weibull. Para el análisis por CF, los conidios se marcaron con diacetato de fluoresceína para detectar actividad de esterasa y con ioduro de propidio para monitorear la integridad de membranas. Las mediciones se realizaron en un citómetro BD FACSAria II.El patrón de inactivación de los conidios de B. cinerea dependió de la concentración inicial de la suspensión y de la concentración de ozono disuelto utilizada en los tratamientos. Las curvas de supervivencia tendieron a ser menos lineales (curvas ?con hombro?) cuanto mayor fue la concentración de conidios y menor la concentración de ozono. En el tratamientode la suspensión de 103 células/mL con 2,5 mg O3/L, no se detectaron microorganismos viables luego de 3 min, mientras que para la concentración de 105 células/mL, este tiempo se incrementó a 10 min. Por otro lado, para la mayor concentración de ozono (4,5 mg O3/L), dichos tiempos se redujeron a 1 y 6 min para concentraciones de 103 y 105 células/mL respectivamente. Las curvas de inactivación fueron ajustadas satisfactoriamente con el modelo weibulliano (R2adj> 0,96), registrándose una respuesta más homogénea de la población al agente oxidante cuanto mayor fue la concentración de ozono. El análisis por CF reveló un importante daño en la integridad de las membranas celulares aún a tiempos cortos de ozonización.La aplicación de ozono fue efectiva para lograr la pérdida total de viabilidad de los conidios de B. cinérea en suspensión, siendo los tiempos de tratamiento necesarios dependientes de la concentración de los conidios y del nivel de ozono aplicado. La ozonización en fase acuosa podría potencialmente emplearse para controlar el desarrollo de B. cinerea en la poscosecha de los frutos.