Adhesión de lactobacilos vaginales potencialmente probióticos a colágeno, fibrinógeno y mucina

MARIA SILVINA JUAREZ TOMAS; MARIA CLAUDIA OTERO; MARIA ELENA NADER-MACIAS

San Miguel de Tucumán

Simposio; Simposio Internacional de Biotecnologia. II Simposio Argentino-Italiano de Bacterias.; 2006

CERELA-CONICET-ANPCyT-

ADHESIÓN DE LACTOBACILOS VAGINALES POTENCIALMENTE PROBIÓTICOS A COLÁGENO, FIBRINÓGENO Y MUCINA M.S. Juárez Tomás, Maria Claudia Otero y Maria Elena Nader-Macias. Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Chacabuco 145. 4000. Tucumán, Argentina. E-mail: fnader@cerela.org.ar Los lactobacilos son los microorganismos predominantes de la microflora vaginal de mujeres sanas en edad reproductiva, no embarazadas y sin menstruación. El empleo de un producto probiótico vaginal que contenga lactobacilos seleccionados por sus propiedades benéficas podría prevenir o tratar infecciones urogenitales en mujeres, mejorando así su salud sexual y reproductiva. Uno de los mecanismos propuestos para explicar el efecto benéfico de lactobacilos en el tracto urogenital es su unión a diversas proteínas del plasma, matriz extracelular y mucus, lo cual puede mediar la colonización de los epitelios. El objetivo del presente estudio fue investigar la adhesión a fibrinógeno, colágeno y mucina de cuatro cepas de lactobacilos potencialmente probióticos aislados de vagina humana. Los microorganismos empleados fueron: Lactobacillus gasseri CRL 1259 y L. reuteri CRL 1324 (inhiben a uropatógenos por ácido láctico), L. salivarius CRL 1328 (productor de bacteriocina), y L. rhamnosus CRL 1332 (productor de H2O2). Las cepas de lactobacilos se desarrollaron en caldo LAPTg a 37°C, y a partir del tercer sub-cultivo de 15 horas de incubación se prepararon suspensiones celulares (107 UFC/ml y 108 UFC/ml) en PBS adicionado de 1% de albúmina bovina. Las proteínas (100 mg/ml de fibrinógeno, colágeno o mucina) se inmovilizaron en microplacas Polysorp, y se evaluó la unión de las suspensiones de lactobacilos durante 2 horas a temperatura ambiente o a 37°C. Las bacterias adheridas se colorearon con cristal violeta, y la densidad óptica del colorante disuelto se determinó a 570 nm (DO570). Bajo las diferentes condiciones de adhesión ensayadas, ninguna de las cepas fue capaz de unirse a colágeno. Además, L. gasseri CRL 1259 y L. salivarius CRL 1328 mostraron una unión débil o nula a fibrinógeno y a mucina. L. rhamnosus CRL 1332 sólo mostró adhesión moderada a fibrinógeno (DO570= 0,11), a mayor concentración celular y a 37°C. Sin embargo, L. reuteri CRL 1324, a una concentración celular de 108 UFC/ml, presentó una fuerte adhesión a fibrinógeno (DO570= 0,31), independientemente de la temperatura de unión. En este microorganismo, la adhesión a mucina fue moderada (DO570= 0,15), y fue afectada tanto por la concentración bacteriana como por la temperatura de unión. Los resultados obtenidos sugieren que podría considerarse la inclusión de L. reuteri CRL 1324 en una fórmula probiótica para prevenir infecciones urogenitales en mujeres, debido a que fue la cepa más adherente a fibrinógeno y a mucina. ADHESION OF VAGINAL POTENTIALLY PROBIOTIC LACTOBACILLUS STRAINS TO COLLAGEN, FIBRINOGEN AND MUCIN M.S. Juárez Tomás, M.C. Otero and M.E.Nader-Macias. Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Chacabuco 145. 4000. Tucumán, Argentina. E-mail: fnader@cerela.org.ar Lactobacilli are the predominant microorganisms of the vaginal microflora of healthy non-pregnant and non-menstruating women in the reproductive age. The use of a vaginal probiotic product containing lactobacilli could prevent or treat urogenital infections in the women, improving their sexual and reproductive health. The binding to several proteins of plasma, extracellular matrix and mucus by Lactobacillus strains can mediate the epithelium colonization, constituting one of the proposed mechanisms that explain the protective role of lactobacilli in the vaginal tract. The aim of the present study was to investigate the adhesion to fibrinogen, collagen and mucin of four Lactobacillus strains potentially probiotic isolated from human vagina. The  microorganisms evaluated were: Lactobacillus gasseri CRL 1259 and L. reuteri CRL 1324 (able to inhibit uropathogens by lactic acid), L. salivarius CRL 1328 (bacteriocin producer), and L. rhamnosus CRL 1332 (H2O2 producer). The lactobacilli were propagated in LAPTg broth at 37°C, and the last pre-culture of 15 hours of incubation was used to prepare bacterial-cell suspensions (107 CFU/ml and 108 CFU/ml) in PBS containing 1% bovine serum albumin. Proteins (100 mg/ml of fibrinogen, collagen or mucin) were immobilized in Polysorp microtitre plates, and the binding of cellular suspensions of lactobacilli was assessed during 2 hours at room temperature or at 37°C. Bacteria adhering were stained with crystal violet, and the optical density at 570 nm (OD570) of dissolved stain was measured. For all strains tested, no binding to collagen was observed. Under the different adhesion conditions, L. gasseri CRL 1259 and L. salivarius CRL 1328 showed weak or no binding to fibrinogen and mucin. L. rhamnosus CRL 1332 only expressed moderate adhesion to fibrinogen (OD570= 0.11), at higher cellular concentration and at 37°C. However, strong adhesion to fibrinogen (OD570= 0.31) was observed with 108 CFU/ml of L. reuteri CRL 1324, independently of the binding temperature. For this microorganism, the adhesion to mucin was moderate (OD570= 0.15), being affected for bacterial concentration and binding temperature. These results suggest that L. reuteri CRL 1324, the more adherent strain to fibrinogen and mucin, could be included in a probiotic formula to prevent urogenital infections in women.