Seleccion de Lactobacillus aislados de ranario en base a la produccion de metabolitos inhibitorios

SERGIO PASTERIS,; GERMAN ROIG BABOT; GERMAN MONTIEL MENDOZA; MARTA BUHLER; MARIA ELENA NADER-MACIAS

San Miguel de Tucumán

Simposio; Simposio Internacional de Biotecnologia. II Simposio Argentino-Italiano de Bacterias.; 2006

CERELA-CONICET-ANPCyT-

SELECCION DE Lactobacillus AISLADOS DE RANARIO EN BASE A LA PRODUCCION DE METABOLITOS INHIBITORIOS S.E. Pasteris1, G. Roig Babot1, G. Montel-Mendoza1, M.I. Bühler1, M.E. Nader-Macías2 1INSIBIO - Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia - UNT y 2CERELA-CONICET. Chacabuco 461. C.P.4000. Tucumán. Argentina. E-mail: fnader@cerela.org.ar La aplicación de microorganismos probióticos ha adquirido gran importancia en el area de acuicultura, destacándose la utilización de cepas de Enterococcus faecium y Lactobacillus spp. Rana catesbeiana está considerada dentro del area de pesquería y en los criaderos es común la aparición de epizotias como el síndrome de la pata roja (SPR), patología que produce la muerte en masa de los animales con elevadas pérdidas económicas. En trabajos previos demostramos que algunas cepas de Lactobacillus crecidas en caldo LAPTg muestran un bajo potencial inhibitorio frente a patógenos de ranarios y que el mismo es debido a ácidos orgánicos. El objetivo del presente trabajo es evaluar el potencial inhibitorio de cepas de Lactobacillus en otros medios de cultivo (MRS) frente a patógenos asociados a SPR y a contaminantes de productos cárnicos. Las cepas de lactobacilos, aisladas de diferentes sectores de un ranario en los meses de junio y diciembre, fueron desarrolladas en caldo MRS durante 24 hs a 37°C mientras que las cepas indicadoras (homólogas y heterólogas) fueron crecidas en medio caldo nutritivo y BHI. Los sobrenadantes de cultivos de lactobacilos fueron neutralizados y tratados con catalasa y enfrentados a diferentes concentraciones iniciales de cultivos de cepas indicadoras, utilizando el método de difusión en placas de agar blando. Las placas se incubaron durante 24 hs a 37°C  y la actividad antagónica se expresó en mm de halo de inhibición. Los resultados mostraron que las cepas aisladas de animales sanos, de animales enfermos y de alimento balanceado en junio presentaron un muy buen perfil inhibitorio sobre todos los patógenos ensayados. El efecto fue por acidez, a excepción de la cepa Lactobacillus 9U, aislada de alimento balanceado, que inhibió a todos los patógenos asociados a SPR por acidez y H2O2. En relación a las cepas aisladas en diciembre, también presentaron un muy buen perfil inhibitorio sobre patógenos de ranarios y contaminantes de productos cárnicos, y en todos los casos fue solamente debido a acidez lo cual se corresponde con los bajos pH alcanzados al final del crecimiento. Cabe destacar que, en las condiciones de experimentación, las cepas aisladas de animales enfermos presentaron un bajo perfil inhibitorio frente a Listeria monocytogenes y Salmonella enteritidis, efecto no observado para los otros grupos evaluados. Estos resultados indican que la actividad inhibitoria de las cepas de lactobacilos fue dependiente de la concentración inicial de los cultivos indicadores y de la zona del ranario de la cual fueron aisladas. Los resultados obtenidos permiten realizar una primera selección de cepas con potencial aplicación en criaderos de R. catesbeiana, entre las que se destaca Lactobacillus 9U. SELECTION OF Lactobacillus STRAINS ISOLATED FROM Rana catesbeina HATCHERIES FOR THE PRODUCTION OF INHIBITORY METABOLITES S.E. Pasteris1, G. Roig Babot1, G. Montel-Mendoza1, M.I. Bühler1, M.E. Nader-Macías2 1INSIBIO - Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia - UNT y 2CERELA-CONICET. Chacabuco 461. C.P.4000. Tucumán. Argentina. E-mail: fnader@cerela.org.ar The application of probiotic products in aquaculture has acquired a high interest in the last years, mainly the use of Enterococcus faecium and Lactobacillus spp strains. Rana catesbeiana is considered a fishery product and the presence of some diseases in hatcheries, such as red-leg syndrome (RLS) can produce animal mass mortality with high economical losses. In previous works, we demonstrated that Lactobacillus strains grown in LAPTg medium showed a low inhibitory effect on RLS-associated pathogens what could be attributed to organic acids. In this work, we studied the inhibitory activity of Lactobacillus strains against RLS-related pathogens and food spoilage bacteria by growing in other culture media (MRS). Lactobacillus strains were isolated from different places of the hatchery during June and July, and they were grown in MRS broth for 24 h at 37°C. Homologous and heterologous indicator strains were grown in nutritive and BHI broths. The inhibitory effect of neutralized and catalase treated lactobacilli supernatants were measured by the well-diffusion method. The plates were incubated for 24 h at 37°C and the inhibitory activity was expressed as mm of inhibition. The results showed that the strains isolated in June from the skin of healthy animals, non-healthy animals and food presented a low inhibitory level against the assayed pathogens. The inhibitory effect was due to acidity. However, Lactobacillus 9U isolated from food, inhibited RLS-associated pathogens  by both, acidity and H2O2. The strains isolated in December showed a good inhibitory profile against pathogens of R. catesbeiana hatchery and food borne bacteria The effect was due to acidity according with the low pH achieved by the supernatant cultures. Under our experimental conditions, the strains isolated from non-healthy animals presented a low inhibitory activity against Listeria monocytogenes and Salmonella enteritidis, effect that could not be observed in others tested lactobacilli. These results indicate that the antagonic activity of lactobacilli depends on the initial concentration of the indicator strains and the area of the hatchery where they were isolated. The results obtained allow us to select a group of Lactobacillus strains which could be used as probiotic for R. catesbeiana, with special interest in Lactobacillus 9U.