Inhibición de Campylobacter termotolerantes debido a sustancias proteinaceas producidas por bacterias ácido lácticas de origen porcino

FRIZZO, L.S.; ZIMMERMANN, J.A.; BERISVIL, A.P.; SIRINI, N.E.; SEQUEIRA, J.G.; ROSMINI, M.R.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; II Congreso Internacional de Zoonosis. IX Congreso Argentino de Zoonosis. Alimentos y Zoonosis: Desafíos del siglo XXI; 2018

Asociación Argentina de Zoonosis

Campylobacter coli y C.jejuni son importantes patógenos transmitidos por los alimentos. Debido aque pueden ser aislados de cerdos sanos y enfermos, es prioritaria la búsquedade estrategias pre-matanza para disminuir la incidencia de estos patógenos enla cadena agroalimentaria. Las bacterias ácido lácticas (BAL) podrían ser unaimportante herramienta para ayudar a mejorar el equilibrio microbianointestinal de los animales y disminuir la colonización por Campylobacter del intestino de los cerdos. Las BAL usan variosmecanismos para ejercer su efecto antimicrobiano, entre ellos, producción de ácidosorgánicos, peróxido de hidrógeno y proteínas de bajo peso molecular denominadasbacteriocinas. Las bacteriocinas tienen la particularidad de ser tóxicas paraun espectro reducido de microorganismos y actúan sobre ellos, sin afectar lamicrobiota acompañante. En estudios previos se determinó que algunas cepas de Campylobacter eran inhibidas por elácido producido por cepas BAL de origen porcino. El objetivo de este trabajofue determinar si la inhibición de C.coli producida por BAL de origen porcino es producto de la presencia desustancias proteicas. Las cepas de C.coli estudiadas fueron: C567 y C570 y las BAL fueron L. reuteri DSPV013C; L.agilis DSPV005C y L. salivarius DSPV014C.Todos los microorganismos pertenecen al cepario del Departamento de SaludPública de la Facultad de Veterinaria UNL. Para evaluar el efecto inhibitorio,se utilizó la prueba de difusión en agar. Las cepas de C. coli se activaron mediante siembra en placa en mCCDA y fueronincubadas durante 48 h en condición de microaerofilia (H2:85%, CO2:10%,O2:5%). Luegose prepararon soluciones microbianas en Ringer-lactato, con una concentraciónde 107 UFC/ml de Campylobactera partir de las placas de mCCDA (escala de Mc Farlan, patrónN° 0,5). Estas fueron sembradas ensuperficie mediante agotamiento en placas de Müller Hinton Agar. Se perforaronpocillos de 5 mm en el agar. Para la preparación de los extractos libre decélulas (ELC), las BAL se cultivaron en caldo MRS a 37 °C durante 24 h enaerobiosis. Se centrifugó el cultivo y el sobrenadante libre de células se neutralizó,ajustando el pH a 7,0 con NaOH 3N (ELCn). Luego se le agregó proteinasa K (1mg/ml) y se calentó 60 minutos a 37°C para la desnaturalización de sustancias proteicapresentes en el sobrenadante (ELCnK). Se sembraron 25µl de cada ELC en lospocillos de las placas con C. coli. Comocontrol positivo se utilizó el ELCn. Las placas se incubaron durante 24 h a 42°C. Luego se observó la presencia o ausencia de halos alrededor de cadapocillo. Ninguno de los ELC tratados con proteinasa k produjeron halos. Estoindicaría que la inhibición fue producida por sustancias proteicas, posiblementebacteriocinas. Es necesario realizar más estudios para determinar si se tratarealmente de bacteriocinas. Es de interés detectar cepas productoras debacteriocinas anti-C.coli porque lasmismas afectarían puntualmente el crecimiento de este agente zoonótico, sinperjudicar el crecimiento de otras poblaciones bacterianas. Estas BAL podríanser potenciales herramientas para reducir la presencia de Campylobacter en las granjas.