Propiedades in vivo del probiótico Lactobacillus reuteri DSPV 002C: colonización intestinal y modulación de la microbiota digestiva de cerdas durante la lactancia

FUSARI, M.L.; ZIMMERMANN, J.A.; BINCI, A.; ROMERO SCHARPEN, A.; BERISVIL, A.P.; ROSSLER, E.; LORENZÓN, G.; FUHR, E.; ASTESANA, D.M.; SIGNORINI, M.L.; ZBRUN, M.V.; BESSONE, F.; ALUSTIZA, F.; FRIZZO, L.S.; SOTO, L.P.

Casilda

Jornada; XVII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2016 - IV Jornada Latinoamericana Facultad de Ciencias Veterinarias; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario

Elsistema digestivo se compone de un complejo y dinámico ecosistema que comprendeuna interacción entre las células de la barrera epitelial, mediadores delsistema inmunológico y una gran cantidad y diversidad de especies microbianas.Los Lactobacillus spp. son componentes importantes de la microbiota intestinaly muchas especies han demostrado presentar propiedades probióticas mediante lamodulación del sistema inmune local y sistémico, la regulación de la microbiotaintestinal y el aumento de la performance productiva de los animales4. Nuestro laboratorioaisló la cepa Lactobacillus reuteri DSPV 002C a partir de la mucosa de íleonporcino y se ha demostrado mediante estudios in vitro que presentacaracterísticas deseadas para conformar un inóculo potencialmente probiótico1.El objetivo del presente trabajo fue evaluar la capacidad de la cepaLactobacillus reuteri DSPV 002C para colonizar el tracto digestivo de cerdas gestantes/lactantes,su influencia en la modulación de la microbiota intestinal y su diseminación enlos lechones de la camada. Previamente a la realización del ensayo in vivo seseleccionaron cepas mutantes de L. reuteri DSPV 002C resistentes a rifampicina(200 μg/ml) agregando dicho antibiótico al medio De Man, Rogosa y Sharpe(MRSrif). Las colonias mutantes obtenidas se conservaron en medio crioprotectora -80°C. La producción de biomasa de la cepa mutante se realizó en unbiorreactor BIOSTAT® A Sartorius y se liofilizó en leche descremada al 6% a0,044 mbar durante por lo menos 48 h a -54°C. El producto liofilizado seconservó a -20 °C hasta su utilización. El ensayo in vivo se realizó en laEstación Experimental Agropecuaria INTA Marcos Juárez ubicada en Ruta 12, km 3,2580, provincia de Córdoba. Se utilizaron 10 madres preñadas (genética Australy Choice Genetic) y sus camadas. Las madres fueron trasladadas a la sala de maternidad7 días antes de la fecha probable de parto y se alojaron en jaulas dematernidad individuales elevadas con piso de plástico y drenaje por canaletacon declive. Cada jaula presentaba un comedero individual para la madre,lámpara infrarroja incandescente, comedero grupal para la camada y chupetesbebederos en dos alturas. Las hembras se dividieron al azar en 2 grupos (grupotratado= GT y grupo control= GC) conformados por 5 cerdas cada uno. Cada cerda recibióuna dieta conformada de la siguiente manera: 66% Maíz, 31% Expeler de soja y 3%de premezcla comercial Teknal L3%. La dieta del GT fue suplementada con 0,1gpor día del probiótico liofilizado que correspondía a por lo menos 1×1011UFC/cerda desde el momento que ingresaron a la sala de parto. El GC recibiójunto con el alimento 0,1g de placebo de igual característica nutricional sinla presencia de L. reuteri DSPV 002C. Se obtuvieron muestras de materia fecal desdecada cerda del GT y del GC a tiempo 0 y a las semanas 1, 2, y 3. A partir delas muestras de materia fecal de las hembras se realizaron recuentos depoblaciones microbianas en medios específicos para bacterias lácticas (MRS),enterobacterias totales (Violet Red Bile Glucose), Escherichia coli (TryptoneBile X-Glucuronide), levaduras (Hongos y Levaduras modificado con 20g/L deglucosa y 5g/L pluripeptona) y para la cepa la probiótica L. reuteri DSPV 002C(MRSrif). También se recolectaron muestras de materia fecal desde un lechón porcamada elegido al azar para monitorear la presencia de la cepa probiótica. Lasmuestras se obtuvieron en la primera, en la segunda y en la tercera semana devida de los lechones. Los datos obtenidos fueron analizados mediante un ANOVAde medidas repetidas. Los recuentos en MRSrif, efectuados en el día previo al iniciodel tratamiento con el inóculo mostraron la ausencia de L. reuteri DSPV002C enla materia fecal de ambos grupos en estudio. La recuperación de la cepa apartir de la materia fecal de las cerdas del GT se observó desde la semana 1posterior al inicio de la administración. Durante esta semana, en el GT, L.reuteri DSPV 002C se encontró en cantidades de 8,27 log10 UFC/g sobre una poblaciónde Lactobacillus spp. totales de 8,92 log10 UFC/g y posteriormente seestabilizó en un valor promedio de 6,42 log10 UFC/g. El análisis de losresultados demostró diferencias significativas entre los grupos experimentalespara levaduras (P= 0,031). El mayor recuento se observó en las cerdas del GTque en promedio alcanzaron 5,55 log10 UFC/g, mientras que en las cerdas del GCel promedio alcanzado fue 4,67 log10 UFC/g. No existieron diferenciassignificativas para bacterias lácticas totales (P= 0,434); enterobacterias (P=0,156); y E. coli (P= 0,631) entre ambos grupos experimentales. La recuperaciónde la cepa a partir de la materia fecal de lechones de las cerdas del GT seobservó desde la primera semana de vida. El promedio de los recuentos en laprimera semana fue de 6,53 log10 UFC/g y permaneció en un valor promedio de5,15 log10 UFC/g durante las siguientes semanas hasta finalizar el ensayo. Larecuperación de L. reuteri DSPV 002C a partir de la materia fecal de las cerdasevidencia la estabilidad de la cepa a los jugos gástricos y la bilis in vivo.Por lo tanto, podemos afirmar que mantuvo sus características probióticas aunhabiendo sido sometida a procesos de liofilización y conservación encondiciones de congelación. La cepa L. reuteri DSPV 002C influyó en lamodulación de la microbiota intestinal de las cerdas ya que hubo diferencias enla población de levaduras. La población de levaduras puede cambiarpotencialmente la microbiota intestinal estimulando selectivamente elcrecimiento de bacterias beneficiosas y suprimiendo el crecimiento de bacteriaspatógenas2. Diferentes autores afirman que la administración de probióticos alas cerdas mejora su rendimiento productivo y reproductivo durante la gestacióny lactancia. Se ha demostrado que la administración de probióticos en estacategoría tuvo efecto positivo sobre el peso de los lechones al nacimiento, aldestete y número de lechones destetados4. Además, mejoran el consumo de alimento,minimizando la perdida sustancial de peso que se produce durante la lactancia4.Éste trabajo también demostró la trasmisión de L. reuteri DSPV 002C a lascamadas, a través del contacto físico con la materia fecal de las madrestratadas. Por lo tanto podemos afirmar que la cepa se diseminó y alcanzó elintestino de los lechones, instaurando una microbiota benéfica desde los primerosdías de vida extrauterina. Además algunos trabajos afirman que la administraciónde probióticos a las madres tiene efectos sobre el establecimiento de lamicrobiota presente en el tracto digestivo de los lechones aún luego deldestete3. A partir de este trabajo podemos considerar a L. reuteri DSPV 002Ccomo un posible candidato para la formulación de aditivos que reemplace el usode antibióticos en las dietas de las cerdas debido a que esta cepa demostrótolerar las barreras físicas orgánicas para alcanzar su sitio de acción a nivelintestinal y moduló la microbiota intestinal. Sería pertinente continuarprofundizando el estudio de la acción probiótica sobre la performance decrecimiento, la protección frente a diarreas así como los mecanismos de acciónmoleculares y otros efectos asociados a su administración.