Estudio de la variabilidad intra-especie de Campylobacter jejuni y Campylobacter coli aislados de la cadena cárnica aviar

OLIVERO, C.; ROMERO SCHARPEN, A.; SIGNORINI, M.L.; SOTO, L.P.; FRIZZO, L.S.; DALLA SANTINA, R.; BONGIOVANNI, F.; ZBRUN, M.V.

Esperanza

Jornada; XII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2011; 2011

Universidad Nacional de Rosario-Universidad Nacional del Litoral

La campylobacteriosis es una enfermedad infecciosa ocasionada por bacterias del género Campylobacter, siendo C. jejuni y C. coli las especies principalmente involucradas en enfermedades gastrointestinales humanas. Las infecciones por Campylobacter son adquiridas por la ingesta de comida, especialmente agua contaminada o productos lácteos, provocando una enfermedad transmitida por los alimentos (ETA). Además, numerosos vehículos de transmisión de las infecciones de Campylobacter han sido descriptos, donde las aves de corral parecen ser el más simple e importante vehículo de transmisión (2). La tipificación genotípica de las especies de Campylobacter es una herramienta importante para detectar, identificar y caracterizar  aquellas especies de importancia epidemiológica y clínica. Para ello, una de las técnicas utilizadas es la PCR-RFLP para el gen flaA. Ésta, se basa en la amplificación del gen de la flagelina de Campylobacter spp., seguida por la digestión con enzimas de restricción de los productos de la PCR. La diferencia en la distribución de los sitios de restricción en los genes flaA entre las cepas, generará fragmentos de diferente tamaño y por lo tanto un modelo de banda diferente, que se visualizará cuando se los separe por electroforesis. Con el fin de determinar la diversidad de cepas dentro de un mismo género, el objetivo de este trabajo fue tipificar genotípicamente las especies de Campylobacter obtenidas de diferentes puntos de muestreo de la cadena cárnica aviar (granja de reproductoras, planta de incubación de huevos, granja de pollos parrilleros, frigorífico y punto de venta). De las 18 cepas de Campylobacter spp. aisladas e identificadas mediante pruebas bioquímicas y confirmadas mediante PCR (1) 13 resultaron ser C. jejuni y 5 C. coli. Para el análisis de estas cepas, se utilizó el método de extracción de ADN por ebullición, se amplificó el gen flaA mediante PCR según la descripto por Nachamkin y col. (3), utilizando los siguientes cebadores: PF, 5?-GGA TTT CGT ATT AAC ACA AAT GGT GC-3?; PR,5?-CTG TAG TAA TCT TAA AAC ATT TTG-3?  [1]. Después de la amplificación se corroboró la presencia de una región amplificada de 1.700 pares de bases en cada una de las 18 cepas procesadas mediante una corrida electroforética en un gel de agarosa al 1% a 80 Voltios (V) constante durante 45 minutos. Del producto de PCR obtenido, 5 µl fueron digeridos con la enzima de restricción AluI e incubados a 37ºC durante 4 horas. Posteriormente, los productos digeridos fueron diluidos en 5 µl de agua bidestilada y analizados en un gel de agarosa al 2% durante una corrida electroforética a 80V constantes durante 120 minutos.La identificación de los perfiles de RFLP de las cepas de Campylobacter tipificadas en este trabajo con la enzima de digestión AluI mostró diferencias en las bandas indicando la presencia de distintos subtipos en cada una de las especies estudiadas. Para C. jejuni, se observaron patrones de banda distintos en 9 de las 13 cepas procesadas por lo que solamente 4 cepas presentaron concordancia en el perfil de bandas. De estas últimas, 2 correspondieron a aislamientos realizados en frigorífico y 2 correspondieron a cepas recuperadas de pollos en el punto de venta. En cuanto a C. coli, se observó diferencia en el perfil de restricción en 3 de las 5 cepas de esta especie ya que 2 mostraron el mismo patrón de bandas, ambas correspondientes a aislamientos provenientes de pollos de góndola. Teniendo en cuenta las cepas aisladas con perfiles de restricción diferentes podemos concluir que el 67% de los microorganismos pertenecieron a subespecies distintas. Estos resultados sugieren una amplia heterogeneidad de cepas tanto en C. jejuni como en C. coli aisladas de la cadena cárnica. Estos hallazgos indican que la metodología utilizada en este trabajo (PCR-RFLP del gen flaA) demostró ser una técnica simple y accesible, capaz de tipificar a este microorganismo. Asimismo, estos resultados sugieren que existe una amplia variabilidad genética de las cepas de Campylobacter lo cual podría resultar en el desarrollo de diferentes patologías provocadas por este microorganismo en humanos, además de la presencia de diferentes perfiles de resistencia frente a antimicrobianos de uso en medicina humana. Este tipo de investigaciones proporcionará información sumamente valiosa para el estudio de la epidemiología y el control de esta enfermedad, ya que queda en evidencia la alta variabilidad que existe dentro de las especies de Campylobacter. 1. Linton,D.;Lawson,A.J.;Owen,R.J.;Stanley,J. PCR detection,identification to species level,and fingerprinting of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli direct from diarrheic samples.Journal of Clinical Microbiology.Vol.35.No.10.:2568-2572.1997.2. Nachamkin,I.;Bohachick,K.;Patton C.M. Flagellin gene typing of Campylobacter jejuni by restriction fragment length polymorphism analysis.Journal of Clinical Microbiology.Vol 31.No.6.:1531-1536.1993.3. Nachamkin,I.;Ung.H;Patton C.M. Analysis of HL and O serotypes of Campylobacter Straits by flagellin gene typing system.Journal of Clinical Microbiology.Vol.34.No.2.:277-281.199.