Capacidad de agregación en bacterias ácido lácticas aisladas desde el tracto digestivo de pollos parrilleros

MARELLI, B.; FRIZZO, L.S.; SOTO, L.P.; ZBRUN, M.V.; BERTOZZI, E.; ROSMINI, M.R.

Casilda, Santa Fe

Jornada; X Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2009; 2009

Facultad de Ciencias Veterinarias-Universidad Nacional de Rosario

El tracto gastrointestinal de los animales está protegido en forma natural por la flora autóctona que lo coloniza a partir del momento de su nacimiento, se adapta a ese ambiente y dificulta la colonización del lumen por otros microorganismos, en especial por los patógenos. Los efectos de la microbiota y sus actividades metabólicas requieren especial atención en el contexto de la producción aviar en la cual la eficiencia del crecimiento de los animales es un objetivo primario. Una fuente para mejorar la colonización intestinal con microorganismos benéficos en los primeros días de vida es a través de un alimento con un aditivo como el que representan los probióticos. Debido a que el aumento en los requerimientos de alta productividad muchas veces generan problemas en Salud Pública1, deben desarrollarse una serie de aditivos alimentarios que traten de mejorar la producción, así como los problemas sanitarios, en reemplazo de los antimicrobianos. Actualmente los probióticos están siendo utilizados como preventivos y surgen como una alternativa de sustitución a los antibióticos2. El uso de estos suplementos alimenticios está dirigido a prevenir enfermedades e incrementar la productividad. La selección de bacterias y su incorporación a dietas como inóculo probiótico, requiere una serie de pruebas in vitro e in vivo, para obtener los mejores exponentes para su utilización en la cría intensiva. Dentro de los criterios de selección in vitro, la capacidad de autoagregar, nos permite entrever su habilidad para adherirse e interactuar con la pared intestinal, compitiendo con los sitios de fijación frente a patógenos causantes de diarreas y de estimular al sistema inmune local y sistémico. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la propiedad de autoagregar de 218 aislamientos bacterianos, integrantes de la microbiota de 9 pollos provenientes de la zona de influencia de la Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV) de la Universidad Nacional del Litoral (UNL). El aislamiento de las bacterias se realizó a partir de diferentes regiones del tracto gastrointestinal de pollos de distintas edades provenientes de diferentes granjas. Para este procedimiento se extrajo el buche, el duodeno y el ciego de los animales de forma aséptica. Luego de la extracción, los órganos se colocaron abiertos en recipientes con solución fisiológica para permitir su lavado. A continuación, se procedió al raspado de los órganos con un bisturí estéril. El contenido extraído se  diluyó 1/10 en Ringer ¼ y se mezcló con vortex. Por último, se realizaron diluciones de la mezcla (10-3; 10-4; 10-5) y se sembraron placas con agar MRS. Las placas se incubaron en jarras de anaerobiosis durante 48 h a 37 ºC. El ensayo de agregación se realizó teniendo en cuenta la técnica utilizada por Reniero et al.3 con algunas modificaciones. Los aislamientos fueron cultivados en caldo MRS, incubados 24 horas a 37ºC y luego repicados. Se centrifugaron 2 ml de cultivo de  cada microorganismo obteniendo el sedimento bacteriano (pellet) en la parte inferior de los tubos y el sobrenadante (extracto libre de células), en la parte superior, el cual fue almacenado. Los pellets fueron lavados dos veces y resuspendidos en solución Ringer ¼ estéril en un volumen igual al original. Posteriormente, se colocó en un tubo 0,9 ml de la suspensión bacteriana y 0,1 ml de su correspondiente extracto libre de células y un tubo control que contenía 1 ml de la suspensión bacteriana, sin el agregado del sobrenadante. La incubación se realizó a temperatura ambiente, efectuando lecturas a tiempos predeterminados (15, 30, 45, 90 y 120 min). El resultado fue considerado positivo cuando se visualizó la formación de partículas similares a arena formadas por las células bacterianas (autoagregación), descendiendo al fondo del tubo y clarificando el sobrenadante. Se obtuvieron 70 aislamientos en buche, 78 en duodeno y 70 en ciego. El porcentaje de cepas que agregaron fue de 31,4 %, 5,1 % y 14,3 % respectivamente para cada porción del tracto digestivo muestreada. Mientras que los microorganismos aislados en el buche mostraron una capacidad variada de agregación, los aislados en ciego presentaron resultados polarizados respecto a los tiempos, en donde se observaron solamente cepas fuertemente y débilmente positivas. En el duodeno sólo se encontraron cepas débilmente positivas (90 y 120 min). Estos resultados indican que los microorganismos estudiados podrían adherirse al epitelio intestinal y efectuar su acción competitiva frente a bacterias indeseables. Esto podría corroborarse con una prueba de coagregación realizada frente a patógenos específicos. En otros ensayos se determinarán otras aptitudes de estas bacterias para colonizar el intestino en pos de seleccionar los mejores exponentes microbianos a los fines de confeccionar un inóculo que permita mejorar el status sanitario y la tasa de crecimiento de pollos parrilleros. BIBLIOGRAFÍA 1.     Fedalto, L.M.; Tkacz, M.; Ader, L.P. Probioticos na alimentação de leitões do desmame aos 63 dias de idade. Arch. Vet. Sci.7:83-88, 2002. 2.     Reid, G.; Friendship, R. Alternatives to antibiotic use: Probiotics for the gut. Anim. Biotechnol. 13:97-112, 2002. 3.     Reniero, R.; Cocconcelli, P.; Bottazzi, V.; Morelli, L. High frequency or conjugation in Lactobacillus mediated by an aggregation-promoting factor. J. Gen. Microbiol. 138:763-768, 1992.