Efecto de altas concentraciones de bilis sobre el crecimiento de lactobacilos aislados desde el ileon porcino

BERTOZZI, E.; FRIZZO, L.S.; SOTO, L.P.; POITEVIN REICHEL, A.; DALLA SANTINA, R.; MARTÍ, L.; ROSMINI, M.R.

Casilda, Santa Fe.

Jornada; IX Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2008; 2008

Facultad de Ciencias Veterinarias-Universidad Nacional de Rosario

Los probióticos son empleados en la alimentación de las explotaciones porcinas como una herramienta para mejorar la productividad. Por definición estos microorganismos mejoran el balance de la microbiota intestinal, logrando efectos benéficos en el animal2, como es la prevención de enfermedades diarreicas3, la mejora en la conversión alimenticia y como una estrategia para disminuir el uso de antimicrobianos. La selección de bacterias para ser incorporadas a las dietas en un inóculo probiótico, requiere de una serie de pruebas in vitro e in vivo, para obtener los mejores exponentes bacterianos. Los criterios de selección mas importantes son tolerancia a la acidez y a la bilis, la actividad antimicrobiana frente a patógenos intestinales y habilidad de adherirse y colonizar el tracto intestinal4. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de diferentes concentraciones de bilis sobre el crecimiento de cepas lácticas de origen porcino con el fin de determinar su comportamiento en la primera porción del intestino. La importancia radica en que los probióticos actúan en porciones posteriores del intestino delgado y para ello deben llegar viables. Las cepas utilizadas fueron Lactobacillus johnsonii DSPV 001C; Lactobacillus reuteri DSPV 002C y Lactobacillus agilis DSPV 003C, las cuales son integrantes de la microbiota de cerdos provenientes de la zona de influencia de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Litoral. Para las determinaciones se utilizaron microplacas de ELISA, las mismas cuentan con 96 cavidades por placa. En cada cavidad se colocó 240 ml de medio MRS (Oxoid) con concentraciones de bilis de 0% (control), 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6% y 7%. Se sembraron por triplicado 3,2 ml de cultivo de los microorganismo en cada concentración de bilis y se incubaron a  37 ºC.  La absorbancia fue medida a una longitud de onda de 650 nm para determinar la curva de crecimiento microbiano. Las tres cepas se comportaron de manera diferente ante la presencia de bilis (gráficos a, b y c). L. reuteri DSPV 002C mostró mayor capacidad de crecer en bajas concentraciones de bilis, mientras que, a valores mas altos (7%) L. johnsonii DSPV 001 fue el que mayor masa bacteriana produjo. Este último microorganismo demostró una baja disminución de crecimiento (36%) con bilis al 2% respecto al control, en cambio, para L. reuteri y L. agilis fue de 51,5% y 79,3% respectivamente. L. agilis DSPV 003C fue el más sensible en presencia de bilis, comportándose de forma uniforme ante diferentes concentraciones y mostrando un crecimiento similar en todas ellas. Según Gotcheva et al.1 (2002) el nivel normal de bilis en intestino es de 0,3% pudiendo llegar al extremo de 2%. Si bien, los resultados mostraron disparidad en el crecimiento de las cepas, todas toleraron concentraciones superiores al 2%. Además, aunque los tres lactobacilos son capaces de resistir y crecer en presencia de bilis y llegarían activas a su principal sitio de acción es evidente que algunas tendrían ventajas respecto de otras. De esta manera, el método utilizado podría emplearse para seleccionar los mejores exponentes microbianos teniendo en cuenta el efecto que la bilis ejerce sobre el crecimiento.