Identificación de genes de virulencia en Enterococcus faecalis DSPV008SA aislada desde sangre aviar obtenida en mataderos

FRIZZO, L.S.; ALVAREZ-CISNEROS, Y.M.; ZBRUN, M.V.; ASTESANA, D.M.; BERISVIL, A.P.; ZOGBI, A.; SEQUEIRA, J.G; ROSMINI, M.R.; PONCE-ALQUICIRA, E.

Córdoba

Congreso; IV Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2012

Ministerio de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Córdoba - Universidad Nacional de Córdoba

Un cultivo bioprotector es un cultivo bacteriano capaz de aumentar la seguridad microbiológica de los alimentos sin modificar las cualidades sensoriales de los mismos. Enterococcus faecalis DSPV008SA es una cepa aislada desde sangre aviar obtenida en mataderos. La misma ha demostrado poseer características deseables para ser empleada como cultivo bioprotector. En trabajos previos se ha informado sobre la capacidad antimicrobiana que posee dicha cepa frente a microrganismos patógenos y alterantes. Sin embargo, la búsqueda de genes de virulencia es importante en cepas con potencial para ser empleadas como cultivos bioprotectores de alimentos. El objetivo de este trabajo fue identificar los genes de virulencia en Enterococcus faecalis DSPV008SA. El ADN genómico fue extraído de un cultivo de 24 h en caldo CGB utilizando el Kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega). El ADN fue empleado en las reacciones de PCR para detectar la presencia de diferentes genes de virulencia a saber: Citolisina A (cylA), Citolisina B (cylB), Citolisina M (cylM), Sustancias de agregación (agg), Gelatinasa (gelE), Proteína superficial enterococal (esp), Adhesina de la pared celular de Enterococcus faecalis (efaAfs), Adhesina de la pared celular de Enterococcus faecium (efaAfm), Feromona sexual (cpd), Feromona sexual (cob), Feromona sexual (ccf) y Adhesina de colágeno (ace). La reacción de PCR se realizó en un volumen de 50 μl, empleando 10 μl de ADN genómico (0,5 μg/μl), 2 μl de cada uno de los dos cebadores 20 μM, 5 μl de buffer 10X color verde, 5 μl de MgCl2 25 mM, 2 μl de mezcla de nucleótidos 10 mM, 0,5 μl de Go Taq-DNA polimerasa 5 U/μl (Promega) y 25,5 μl de agua bidestilada. La reacción se llevó a cabo en las siguientes condiciones: desnaturalización inicial a 94°C durante 2 min, 30 ciclos de desnaturalización a 94°C durante 1 min, hibridación a 54°C durante 1 min y extensión a 72°C durante 1 min. Finalmente, se realizó una extensión final a 72°C durante 5 min. El tamaño de los productos de PCR se determinó mediante electroforesis en agarosa 1% (p/v) y se comparó con los tamaños esperados. Como control negativo se utilizó Enterococcus faecium SF68 (para todos los genes excepto esp, efaAfm, cob y ccf). La PCR mostró resultados positivos para los genes de virulencia agg, gelE, efaAfs, cpd, ccf y ace encontrándose tamaños de amplificados compatibles con los genes buscados. El hecho que la cepa presente estos genes de virulencia podría impedir su utilización masiva como probiótico o cultivo protector de alimentos. Sin embargo estudios in vivo, en animales de laboratorio, sobre la seguridad de cepa deben ser realizados para confirmar o descartar esta hipótesis.