Detección de Campylobacter jejuni y Campylobacter coli en la cadena cárnica aviar

ROMERO SCHARPEN, A.; OLIVERO, C.; SIGNORINI, M.L.; SOTO, L.P.; FRIZZO, L.S.; ROSMINI M.R; BONGIOVANNI, F.; ZBRUN, M.V.

Esperanza

Jornada; XII Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2011; 2011

Universidad Nacional de Rosario-Universidad Nacional del Litoral

Campylobacter spp. es la causa mas común de infección gastrointestinal humana en el mundo(2). Su dosis infectiva es muy baja, por lo que un bajo número de células ingeridas es suficiente para causar enfermedad (3). La FAO/WHO (2004) estimula el estudio de estos patógenos a lo largo de toda la cadena agroalimentaria ya que permitiría determinar la prevalencia de los patógenos y estimar el riesgo de infección (1) luego del consumo de carne contaminada. Si bien se conoce que existen principalmente 2 especies patógenas para humanos, en nuestro país no se han realizado suficientes investigaciones que permitan concluir si existen diferencias en sus prevalencias. Ésto es en parte debido a las dificultades para distinguir entre las especies de Campylobacter basándose únicamente en propiedades fenotípicas comúnmente usadas en laboratorios clínicos (4). En este sentido, sería adecuado implementar técnicas de biología molecular para conocer y entender la dinámica de esta enfermedad a nivel cadena productiva y así desarrollar un adecuado plan de control de la misma. El objetivo de esta investigación fue evaluar la prevalencia de Campylobacter spp. en pollos a lo largo de la cadena cárnica aviar. Se fijaron los siguientes eslabones de la cadena cárnica: gallinas reproductoras, huevos en planta de incubación, pollos parrilleros de una semana de vida y de 45 días, frigorífico y punto de venta. En la etapa de reproductoras se tomaron muestras de cloaca por hisopado de 15 gallinas, en las etapas de pollos de una semana y de 45 días se utilizó la misma técnica, pero se muestrearon 30 aves. En estos dos últimos casos también se tomaron muestras al azar: del alimento balanceado (AB), de la cama y de los bebederos de agua, como del lugar de almacenamiento de los mismos (silo de AB, tanque de agua y cama de reposición). En la etapa de huevos en incubadora se analizaron 15 huevos, cáscara y contenido por separado. En el frigorífico se tomaron 10 pollos y se evaluaron dos técnicas de muestreo en paralelo (hisopado y lavado de carcasa con solución de Ringer 1/4) con el objetivo de comparar cuál permitía aislar mayor cantidad de cepas. Además en esta etapa se muestrearon 10 hígados y 10 ciegos. Por último, en el punto de venta se realizó lavado de carcasa de 10 aves. Para el aislamiento de Campylobacter spp. se utilizó caldo Bolton adicionado con un 5% de sangre equina hemolizada. Las muestras fueron incubadas bajo condiciones de microaerofilia a 42ºC por 24h. Pasado este tiempo los caldos con crecimiento se sembraron por agotamiento en agar Preston, incubando nuevamente en microaerofilia a 42ºC por 48h. Las colonias características fueron observadas con microscopio de contraste de fases mediante preparación de frescos a partir de cultivos jóvenes. Las cepas con movilidad y morfología característica fueron considerados microorganismos presuntivos. A estas cepas se les realizó extracción de ADN por ebullición para luego realizar una PCR utilizando cebadores específicos (2) para C. coli y C. jejuni. Los productos de la PCR fueron visualizados en un gel de agarosa al 2%, teñido con Gel Red utilizando como buffer de corrida TBE 1X.  De toda la cadena se pudieron aislar 25 cepas presuntivas: 5 de gallinas reproductoras, 3 de pollitos de 1 semana de vida, 8 de la etapa de frigorífico (4 de lavado de carcasa, 1 de hisopado de carcasa, 2 de hígado y 1 de ciego), y las últimas 9 pertenecieron a pollo en góndola. Posteriormente, fueron evaluadas mediante PCR observando que el 56% de ellas pertenecían a Campylobacter jejuni (2 de reproductoras, 6 de frigorífico y 6 de góndola) y solo el 28% a Campylobacter coli (1 de reproductora, 2 de pollitos de 1 semana, 2 de frigorífico y 2 de góndola). El resto de los aislamientos (16%) presentaron dos bandas, una correspondiente a C. coli y otra a C. jejuni (2 de reproductoras, 1 de pollitos y 1 de góndola) indicando la presencia de las 2 especies en una misma unidad formadora de colonia. Este trabajo preliminar nos permitió aislar cepas de Campylobacter spp. en diferentes etapas de la cadena confirmando la contaminación de pollos parrilleros, siendo crítica la etapa “punto de venta” ya que se aisló el microorganismo en el 90% de las muestras evaluadas.  Al comparar los dos procesos de muestreo en frigorífico, hisopado y lavado de carcasa, el segundo presentó mayor tasa de recuperación. Así podemos concluir que Campylobacter spp. altamente prevalente en pollos que serán consumidos por personas, las cuales estarán en riesgo de enfermarse. Por lo mencionada anteriormente, sería de real importancia controlar toda la cadena cárnica aviar así como las prácticas de manipulación de estos alimentos. 1. FAO/WHO. Risk assessment of thermophilic Campylobacter spp. in broiler chickens. Microbiological risk assessment series. No 8. FAO/WHO, Rome, Geneva. 2004. 2. Linton, D.; Lawson, A. J.; Owen, R. J.; Stanley, J. PCR Detection, Identification to Species Level, and Fingerprinting of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli Direct from Diarrheic Samples. Journal of clinical microbiology. 35, 10: 2568–2572. 2007. 3. Liu, G.; Han Y.; Li, X.; Song, S. Applicability of a rapid method based on immunomagnetic capture-fluorescent PCR assay for Campylobacter jejuni. Food Control 17:527–532. 2006. 4. On S. L. W. Identification methods for campylobacters, helicobacters, and related organisms. Clin. Microbiol. Rev. 9:405–422.1996.