Identificación molecular de cepas de Saccharomyces cerevisiae aisladas de uvas Bonarda, empleando análisis de RFLP de la región ITS.

FABANI, M. PAULA; TORO, M. EUGENIA; CASTRO, OLGA; WUNDERLIN, DANIEL A.; VÁZQUEZ, FABIO

Buenos Aires – Argentina

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología General; 2007

SAMIGE

En los últimos años, los métodos de genética molecular han cobrado relevancia en la identificación y caracterización de levaduras relacionadas con la industria vitivinícola, comparados con métodos tradicionales basados en características morfológicas y fisiológicas. Este interés se debe a que estas están fuertemente influenciadas por las condiciones de cultivo, pudiendo dar resultados inciertos. Además, se necesitan de 50-100 ensayos para tener una identificación adecuada. Las técnicas de biología molecular son de ejecución sencilla, con tiempo de realización relativamente corto y poseen una alta reproducibilidad, independiente del estado fisiológico del cultivo. El objetivo del trabajo fue confirmar mediante técnicas moleculares de RFPL en la región 5.8S-ITS, 6 aislamientos del varietal Bonarda que habían sido identificadas previamente por métodos bioquímicos como Saccharomyces cerevisiae. Se realizó el aislamiento y cuantificación del ADN total. Posteriormente se analizó los perfiles de restricción (RFLPs) del ADN ribosomal de la región 5.8S-ITS, la cual se amplificó empleando los primers ITS1 e ITS4. El ADN amplificado fue digerido sin previa purificación con las enzimas de restricción HaeIII e HinfI, e incubado a 37ºC durante toda la noche. También se obtuvieron los perfiles de restricción (RFLPs) del ADN mitocondrial realizando la digestión del ADN total con la enzima HinfI e incubado a 37ºC durante 24 horas. Los productos de PCR y sus fragmentos de restricción, así como el ADN total digerido, fueron separados en geles de azarosa al 1% y 2%, mediante electroforesis. Resultados: La región 5.8S-ITS amplificada por PCR mostró una banda de aproximadamente 850 pb, los patrones de bandas para las enzimas fueron para HinfI (365+155) y para HaeIII (320+230+180+150), correspondiendo dichos tamaños a patrones de bandeo de cepas de Saccharomyces cerevisiae. Los perfiles de ADNm permitieron diferenciar a nivel de cepa los aislamientos. Con los resultados obtenidos se confirmó la identificación previa realizada empleando métodos tradicionales, aunque en menor cantidad de tiempo y además permitió agrupar los aislamientos en tres clases de cepas diferentes en función de los resultados de los perfiles de ADNm obtenidos.