Caracterización de epitopes continuos de la proteína p80 del virus de la Diarrea viral bovina mediante el empleo de péptidos sintéticos y bibliotecas peptídicas

PAULA INÉS GATTI; MARÍA LUJÁN CAPRA

Santa Fe

Jornada; IV Encuentro Nacional de Jóvenes Investigadores; 2000

Secretarías de Ciencia y Técnica y de Bienestar Universitario de la UNL, la Federación Universitaria del Litoral y la Federación Universitaria Argentina

(Modalidad de la Presentación: POSTER)        El virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) es un virus del género pestivirus perteneciente a la Familia Flaviviridae. Está subdividido en dos genotipos y dos biotipos: citopático y no citopático, ambos involucrados en la patogenia de la Enfermedad de las mucosas, la manifestación clínica más severa de infección por BVDV. Además de la enfermedad gastrointestinal, el BVDV da origen a animales persistentemente infectados (PI). Un animal PI es el principal reservorio y fuente de infección del virus, la identificación y eliminación de los PI constituye el componente principal de los programas de sanidad animal. El empleo de péptidos sintéticos como metodología innovadora en el campo biotecnológico para mejorar la calidad diagnóstica de enfermedades virales, tiene la particularidad de emplear antígenos estables, sensibles y altamente reproducibles, obviando el empleo de agentes infecciosos y garantizando un óptimo grado de bioseguridad en el laboratorio. La NS3 proteinasa/helicasa de ARN (p80), es la proteína no estructural más altamente conservada del virus, a diferencia de la glicoproteína de superficie E2, muy variable entre distintas cepas. El objetivo de este trabajo fue seleccionar secuencias peptídicas correspondientes a epitopes continuos de la NS3 (p80), sintetizarlos y evaluar la actividad biológica en ensayos ELISA frente a paneles de sueros bovinos infectados. Se sintetizaron tres péptidos que pertenecen a la región C-terminal de la proteína NS3, utilizando la química del 9-fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC) en fase sólida. Se empleó como soporte sólido resinas de poliestireno derivatizadas químicamente para su funcionalización. El análisis de pureza de las secuencias peptídicas se realizó por HPLC analítico (Gilson), empleando columnas Waters Delta Pak C18, detección a 220 y 280 nm. Para evaluar la actividad biológica de los antígenos sintéticos, se realizó un EIA indirecto, inmovilizándose los antígenos por adsorción sobre placas de poliestireno, empleando como conjugado antigammaglobulina bovina marcada con peroxidasa, como sustrato tetrametilbencidina (TMB) y agua oxigenada. Se utilizó como prueba de referencia la "Seroneutralización en microplacas" frente a 100 TCID50 de la cepa 1138/69. El péptido identificado como NS3-1 (según esquema de síntesis), ha mostrado la capacidad de diferenciar paneles de sueros reactivos y no reactivos, que se correlacionan con resultados obtenidos al evaluar una biblioteca peptídica correspondiente a la zona estudiada.