ACTIVIDAD ANTIPROLIFERATIVA DE LAS PROTEÍNAS DE AMARANTO MODIFICADAS POR HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA

ANA CLARA SABBIONE; ADRIANA ALICIA SCILINGO; DANIEL A. BARRIO; MARÍA CRISTINA AÑÓN

Capital Federal

Jornada; II Jornadas Internacionales sobre avances en la tecnología de películas y coberturas funcionales de alimentos; 2010

Instituto del Frío Instituto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos y Nutrición

Muchas de las enfermedades prevalentes en el mundo hoy en día presentan una importante relación con la alimentación, pudiendo la dieta contribuir a la causa de las enfermedades, aumentar el riesgo a padecerlas, producir un efecto benéfico que disminuya su padecimiento o hasta prevenirlas. Una alimentación saludable combinada con la ingesta de alimentos funcionales puede ayudar a minimizar e incluso eliminar ciertas enfermedades.Se ha visto que las proteínas y péptidos de semillas de amaranto presentan propiedades biológicas deseables tales como antimicrobianas (1), antihipertensivas (2) y antiproliferativas (3). Para generar mayor conocimiento acerca de las propiedades biológicas de las proteínas de amaranto se estudió la potencial actividad antitumoral de aislados e hidrolizados proteicos de amaranto. En el presente trabajo se utilizaron semillas de Amaranthus mantegazzianus (INTA-Anguil, La Pampa, Argentina). El aislado y la fracción albúmina se prepararon a partir de la harina desgrasada con hexano (4; 5; 6). Los hidrolizados proteicos se obtuvieron empleando alcalasa (1,71U Anson/g sólido; 0,08 µl/mg de aislado, 20 min, 37ºC) y tripsina (10600 U BAEE/mg sólido; 0,01 mg/mg de aislado, 20 min, 37ºC). La reacción se detuvo calentando la mezcla de reacción (85ºC, 10 min).Se determinó la composición de aislado, albúmina e hidrolizados: proteínas (Kjeldahl), hidratos de carbono (antrona), humedad (método indirecto) y cenizas (calcinación). El grado de hidrólisis se obtuvo con el método del TNBS (7). Las muestras se caracterizaron mediante electroforesis SDS-PAGE y Tricina-SDS-PAGE con y sin 2-ME, cromatografía de exclusión molecular y calorimetría diferencial de barrido.Para determinar la potencial actividad antitumoral in vitro se utilizaron células de origen tumoral (UMR106) obtenidas a partir de un osteosarcoma de rata. Los diferentes aislados e hidrolizados proteicos se solubilizaron en medio DMEM y se adicionaron al cultivo en diferentes concentraciones (0-5 mg/ml). Luego de 24 h de incubación las células se lavaron con PBS y se fijaron con glutaraldehído (5% en PBS). El número de células se determinó empleando el bioensayo del cristal violeta (8). El colorante incorporado por las células viables se extrajo con buffer glicina-HCl pH 3 y se cuantificó midiendo la absorbancia a 540 nm. El número de células es proporcional al colorante incorporado por las mismas. Los resultados encontrados permitieron observar que la hidrólisis del aislado y de las albúminas genera polipéptidos de menor masa molecular que los hallados en las muestras sin tratamiento enzimático, y provoca la pérdida de estructura de las proteínas de amaranto.Las curvas dosis-respuesta obtenidas presentan un comportamiento bifásico sobre la proliferación de células tumorales tanto del aislado proteico, como de la fracción albúmina y sus hidrolizados. La Tabla 1 muestra los valores encontrados para el parámetro IC50, entendido como la concentración de proteínas que provoca la inhibición del 50% de la proliferación celular, calculado a partir de las diferentes curvas dosis respuesta de inhibición obtenidas con las muestras ensayadas. Los resultados sugieren que en los aislados proteicos de amaranto se encontrarían presentes péptidos con actividad citomoduladora, cuya potencia aumenta a medida que aumenta el grado de hidrólisis. La fracción albúminas, tan efectiva como el hidrolizado del aislado, podría ser la responsable de la actividad citomoduladora que presenta el aislado proteico de amaranto. Conclusiones- Las muestras ensayadas presentarían potencial actividad antitumoral ya que producen inhibición sobre la proliferación de células tumorales in Vitro.- La hidrólisis enzimática incrementa la actividad antiproliferativa.- La fracción albúminas es más activa que el aislado.- Los hidrolizados de la fracción albúmina son más activos que el hidrolizado del aislado de amaranto, aún cuando el GH es menor