Actividad antitrombótica de proteínas de amaranto sometidas a digestión gastrointestinal simulada. Identificación de su fracción activa

ANA CLARA SABBIONE; AGUSTINA NARDO; ADRIANA ALICIA SCILINGO; MARÍA CRISTINA AÑÓN

Córdoba

Congreso; V Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos (CICYTAC 2014); 2014

Secretaría de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Córdoba

Existe una importante relación entre la alimentación y algunas enfermedades prevalentes en el mundo. Tal concepto invita a explorar propiedades biológicas de interés para la salud en diversas fuentes alimentarias. Las proteínas de las semillas de amaranto han sido el objeto de estudio de nuestro grupo de investigación como fuente potencial de compuestos con acción fisiológica benéfica. Con el objetivo de generar mayor conocimiento de las mismas se decidió explorar la existencia de péptidos de amaranto con actividad antitrombótica. Con tal fin, se preparó un aislado proteico a partir de harina desgrasada obtenida de semillas de Amaranthus hypochondriacus (UNRC, Córdoba, Argentina) mediante extracción a pH 9 y precipitación isoeléctrica a pH 5. El aislado se sometió a digestión gastrointestinal simulada tratándolo inicialmente con pepsina (0,1g pepsina/g proteína en 0,1N HCl y 0,03M NaCl, pH 2) a 37°C durante 1 hora, y luego con pancreatina (0,1g pancreatina/g proteína en 0,1M NaHCO3, pH 6) en iguales condiciones. Las muestras se caracterizaron mediante la determinación de la concentración proteica (Kjeldahl), del grado de hidrólisis (OPA) y la realización de electroforesis Tricina-SDS-PAGE con y sin agente reductor. Empleando el método de las microplacas se determinó la actividad antitrombótica in vitro del aislado y del digerido. Los resultados obtenidos muestran que en las proteínas de amaranto se encuentran péptidos con actividad antitrombótica que se liberan una vez que es sometido a la digestión gastrointestinal simulada (Digerido: 68,4 ± 0,8 g proteína/g hidrolizado y 51,1 ± 3,8 GH%). El aislado proteico (82,4 ± 1,6 g proteína/g aislado) no fue capaz de inhibir la coagulación a las concentraciones estudiadas, mientras que el digerido presentó una curva de inhibición del tipo dosis-respuesta que permitió calcular un IC50 de 0,23 ± 0,02 mg/ml. Mediante FPLC de exclusión molecular se logró separar a partir del digerido una fracción activa con comportamiento dosis-dependiente cuyo IC50 fue 0,07 ± 0,01 mg/ml. Dicha fracción se analizó por espectrometría MALDI-TOF. Se identificaron 9 péptidos provenientes de la globulina 11S y 6 péptidos de la lectina de amaranto. Mediante el uso de herramientas bioinformáticas (composición aminoacídica, alineamientos secuenciales con inhibidores de la trombina conocidos, screening molecular) se analizaron las secuencias identificadas con el fin determinar las secuencias candidatas a sintetizar para posteriores estudios.