Validación de Sondas Fluorescentes para la Identificación de Propionibacterias Clásicas Mediante FISH

BABOT, JAIME DANIEL; HIDALGO, VÍCTOR MAXIMILIANO; LORENZO PISARELLO, MARÍA JOSÉ; APELLA, MARÍA CRISTINA; PÉREZ CHAIA, ADRIANA

Santiago - Chile

Congreso; XV Congreso Latinoamericano de Nutrición - SLAN Cile 2009 - Nutrición, Alimentos y Desarrollo en América Latina; 2009

Sociedad Chilena de Nutrición, Bromatología y Toxicología y Asociación Chilena de Nutrición Clínica y Metabolismo

Las propionibacterias clásicas cumplen un importante papel en la industria láctea. Algunas de estas especies se usan como cultivos iniciadores en la producción de quesos de tipo suizo. La fermentación propiónica también ha sido explotada en la manufactura de pan y productos vegetales fermentados para el consumo humano, mejorando tanto la preservación como la calidad nutricional de dichos productos. Para tales aplicaciones debe contarse con cepas perfectamente identificadas. La identificación de propionibacterias mediante métodos tradicionales es lenta, y ciertas especies pueden ser difíciles de identificar correctamente. La Hibridación Fluorescente In Situ (FISH) combina la precisión de la genética molecular con la información visual de la microscopia para permitir la visualización e identificación de microorganismos en su microhábitat natural. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue diseñar sondas para este género bacteriano, y validarlas a través de la identificación de cepas de propionibacterias de colección y cepas aisladas de heces de animales y de leche cruda de vacas lecheras, comparando los resultados con los obtenidos por técnicas de uso corriente. Se diseñaron tres sondas dirigidas al  ARNr 16S marcadas fluorescentemente, Pap446, Pj446 y Pfr435, específicas para Propionibacterium acidipropionici, P. jensenii y P. freudenreichii respectivamente. Para validar las sondas, se utilizaron cultivos de cepas de la colección de CERELA y de ocho cepas aisladas en este trabajo, los cuales se identificaron mediante Sistema API 50 CH, estudio de los productos de fermentación y PCR con cebadores específicos de especie. Mediante FISH, se identificaron dos de las cepas aisladas como P. acidipropionici, correspondiendo la relación de ácidos propiónico y acético producidos por las mismas con la descripta para esa especie. Estos resultados estuvieron de acuerdo con los obtenidos mediante Sistema API 50 CH y PCR con cebadores específicos de especie. Las restante seis cepas no pudieron ser identificadas como propionibacterias clásicas por ninguna de las técnicas usadas. Puede concluirse entonces, que las sondas diseñadas permiten la identificación fiable de nuevas cepas de propionibacterias clásicas aplicables a la manufactura de quesos, productos de panificación y probióticos.