Caracterización de la interacción: proteínas del lactosuero (Bubalus bubalis) - Vitamina B9, para la construcción de nanocomplejos

LEANDRO FABIÁN BUSTOS; FRANCO EMANUEL VASILE; MARÍA ALICIA JUDIS; OSCAR EDGARDO PEREZ

Buenos Aires

Jornada; II Jornadas de Jóvenes Bionanocientificxs - JoBioN; 2020

Universidad de San Martin

El lactosuero generado durante la elaboración de quesos a partir de leche de búfala (Bubalus bubalis) es un subproducto rico en lactosa y proteínas, que puede ser aprovechado para diferentes aplicaciones. Una de ellas constituye el desarrollo de vehículos para el transporte y protección de compuestos bioactivos foto y termosensibles como el ácido fólico. Esta molécula es una forma sintética de la vitamina B9, la cual demostró ser efectiva para reducir el riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares y varios tipos de cáncer. Una etapa fundamental en el desarrollo de estos vehículos es la caracterización de la interacción transportador - bioactivo. Por ello, el objetivo de este trabajo fue analizar la interacción de las proteínas del lactosuero bubalino con el ácido fólico mediante apagamiento (quenching) de la fluorescencia. Para esto, se prepararon soluciones de ácido fólico de calidad analítica (AF) (0, 5, 10, 20 y 50 µM) en buffer fosfato salino (pH 7,4), conteniendo 20 µM de proteínas de lactosuero bubalino - BWPC (63% de proteínas). Luego, se obtuvieron los espectros de fluorescencia en el intervalo 305 - 400 nm con λex de 280 y 295 nm, respectivamente. En ausencia de AF, las muestras presentaron la máxima emisión a 334 nm (λmax) para ambas longitudes de excitación, lo cual se atribuyó a la fluorescencia intrínseca de las proteínas del suero. En presencia de AF, la intensidad de los espectros disminuyó, lo cual podría atribuirse a la formación de complejos entre las moléculas. En todos los casos, λmax, se mantuvo constante, indicando que el acomplejamiento no modificó el microambiente de los residuos Trp ni Tyr. El aumento en la concentración de AF produjo una reducción gradual en las intensidades de fluorescencia y este efecto se modeló por la ecuación de Stern-Volmer. El ajuste de los datos experimentales mostró buena correlación (R=0.99) para ambas longitudes de excitación. A partir del modelo, se obtuvieron las constantes de quenching, resultando 2,32x1012 M-1s-1 para λex= 280 nm y 1,92x1012 M-1s-1 para λex= 295 nm. Estos valores, permiten clasificar a las interacciones proteínas - AF como quenching de tipo estático, esto es, la fracción proteica del BWPC, conduce a la formación de complejos permanentes. Estos resultados advierten el potencial uso de BWPC en el desarrollo de sistemas de delivery para esta vitamina.