Desarrollo y validación de un método UV-HPLC para la determinación de vitamina C en frutillas, utilizando diseños experimentales para la optimización y el estudio de robustez

FRANCO VAN DE VELDE; CELILA MARÍA DEL HUERTO BERNARDI; DANIEL GÜEMES; MARÍA ÉLIDA PIROVANI; MARÍA SILVIA CÁMARA

Santa Fe, Prov. de Santa Fe

Congreso; 6° Congreso Argentino de Química Analítica; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos - CONICET - AGENCIA - Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Facultad de Ingeniería Química, Universidad Nacional del Litoral

La vitamina C o ácido ascórbico total (AAT) en frutas es la suma del contenido de ácido ascórbico (AA) más el de ácido dehidroascórbico (ADHA) [1]. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un método UV-HPLC para el análisis de AA y AAT en muestras de frutillas. La fase móvil utilizada (FM) fue una solución buffer de ácido acético/acetato de sodio 30 mM (95%) y metanol (5%). Para la optimización, se utilizó un diseño de superficie respuesta de Box-Behnken (3 factores en 3 niveles: pH de FM (A): 3,8-5,8; longitud de onda (B): 240-270 nm y caudal (C): 0,5-1,2 ml/min), siendo las respuestas analizadas: áreas y anchos de picos y tiempos de retención para las especies AA y AAT. La optimización global se realizó empleando la función deseabilidad de Derringer (D) [2], combinando las deseabilidades parciales para cada respuesta. El valor de D obtenido fue de 0,84, para la combinación de factores: A (5,8), B (251nm) y C (1,15 ml/min). Para la validación del método se estudiaron los siguientes parámetros: linealidad, rango lineal, límites de detección y cuantificación y sensibilidades de calibración y analítica para las especies AA y AAT, empleando soluciones patrones. Para el análisis de la precisión y de la exactitud, se trabajó con extractos de frutillas en acetona (80%) y agua (20%). El contenido de ADHA se obtuvo como la diferencia entre el AAT y el AA para cada muestra. La precisión se estudió sobre 6 extractos y los valores de CV % fueron: AA: 1,47 %; AAT: 1,80% y ADHA: 12,48%. La exactitud se estudió realizando adiciones estándares de AA, en un intervalo entre 12 y 60 mg %, cubriendo el rango de concentraciones de vitamina comúnmente encontrado en las frutillas. Un estudio de la región elíptica de confianza conjunta (EJCR) [3] para la pendiente y la ordenada al origen entre los valores nominales y hallados para AA y AAT, permitió concluir que los resultados del método no difieren significativamente de los valores de referencia usados. La robustez del método [4] se analizó utilizando un diseño factorial fraccionado (34-2). Los factores se estudiaron en pequeñas modificaciones de las condiciones experimentales optimizadas: pH de FM (5,7-5,9), longitud de onda (250-252nm), caudal (1,10-1,20) y % de metanol en FM (3-7%). La respuesta analizada fue la recuperación de AA y AAT, observándose que sólo el caudal es significativo para AAT, lo cual confirma la robustez del método.