Desarrollo Y Validación de un método analítico UV-HPLC para la determinación de vitamina C en frutillas

VAN DE VELDE, FRANCO; GÜEMES, DANIEL RAÚL; PIAGENTINI, ANDREA; BERNARDI, CECILIA; PIROVANI, MARIA ÉLIDA

Concordia, Entre Ríos

Congreso; XII Congreso Cytal 2009; 2009

Asociación Argentina de Tecnólogos Alimentarios (AATA)

La vitamina C en las frutas se considera que es la suma del contenido de ácido ascórbico (AA) más el de ácido dehidroascórbico (ADHA). Para medir la concentración de vitamina en frutas específicas es necesario contar con un método de HPLC adecuado.El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un método UV-HPLC para el análisis de vitamina C en frutillas, usando una fase móvil tamponada a un pH óptimo, tanto para el análisis de ácido ascórbico como para la preservación de la columna; y de baja concentración, para evitar problemas de precipitación y lavados intensivos del sistema posteriores al uso. Las frutillas (Fragaria ananassa Duch, cultivar Camarosa) fueron lavadas, despedunculadas, cortadas en cuartos, trituradas en ácido metafosfórico 0,85% y centrifugadas a 4°C durante 15 min. Para la determinación de AA, el sobrenadante fue diluido, filtrado e inyectado en el sistema de HPLC. Para cuantificar vitamina C, se agregó al sobrenadante, DL-ditiotreitol 0,5%, con el fin de reducir el ADHA a AA. El contenido de ADHA fue calculado como la diferencia entre la cantidad de vitamina C y AA. El equipo utilizado fue un HPLC–KONIK KNK–500–A Series, acoplado a un espectrofotómetro Uvis 200. Las muestras fueron inyectadas en un inyector manual con un loop de 20µL, usando una columna de fase reversa Phenomenex Gemini 5µ C18 110A unida a un guardacolumna. La fase móvil utilizada fue una solución 0,03M de acetato de sodio/ácido acético pH=4. La velocidad de flujo fue de 1ml/min a temperatura ambiente. El método fue validado evaluando linealidad, sensibilidad, precisión y exactitud. Se realizó una comparación de métodos, analizando las muestras de AA con el método del 2,6 diclorofenolindofenol (DCIP) modificado. El análisis de la varianza de la regresión lineal mostró una relación significativa entre las áreas y las concentraciones de AA para un nivel de confianza del 99%. El valor de R2 mostró que el 99,86% de la variación de los datos son explicados por el modelo. Los resultados obtenidos para el  límite de detección (0,26mgAA/ml) y el de cuantificación (0,88mgAA/ml) fueron más bajos que los encontrados en frutillas, por lo tanto el método puede considerarse suficientemente sensible.  En cuanto a la precisión, el valor de la desviación estándar relativa (RSD) para el contenido de AA fue 4,6; 4,4 para Vitamina C y 27,9% para ADHA. Tanto para AA como vitamina C, los RSD fueron aceptables de acuerdo al criterio de Horwitz, no así para ADHA cuyo RSD fue alto. Según los estudios de recuperación, el método presentaría exactitud aceptable. Los resultados no mostraron diferencias significativas, al comparar el método de HPLC con el de DCIP.