ENCAPSULACIÓN DE DROGAS EN NANOPARTICULAS DE POLIHIDROXIBUTIRATO (nanoPHB)

ALVAREZ DANIELA S; DÍAZ PEÑA ROCÍO; MICHELINI FLAVIA M; GARCÍA CYBELE C; WETZLER DIANA E; MARTÍNEZ KARINA D.; MEZZINA MARIELA P; PÉREZ OSCAR E.,; PETTINARI M JULIA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

Introducción y Objetivos:Los polihidroxialcanoatos son polímeros biodegradables sintetizados por algunasbacterias como reserva de carbono y energía. El más conocido de estosbiopolímeros, y el más frecuentemente encontrado en la naturaleza, es elpolihidroxibutirato (PHB). El PHB es un compuesto biocompatible y noinmunogénico, por lo que resulta apropiado para usos en medicina. En estetrabajo nos propusimos desarrollar nanopartículas de PHB (nanoPHB) para laliberación de drogas antivirales. Hemos logrado poner a punto las condicionespara la obtención de nanoPHB con dimensiones definidas y reproducibles mediantela técnica de emulsificación. El objetivo de esta etapa del trabajo fuecompletar la caracterización del sistema y lograr la encapsulación de drogas. Materiales y Métodos:Para la preparación de nanoPHB cargadas con compuestos hidrofóbicos, se losdisolvió junto con el PHB en el solvente orgánico y luego se procedió con laemulsificación promovida por aplicación de ultrasonidos de alta intensidad. Eltamaño de las nanopartículas se determinó por dispersión dinámica de luz (DLS).La concentración de PHB y de los compuestos encapsulados se determinó medianteGC. La caracterización estructural de las nanoPHB se realizó mediante dostécnicas de microscopía. Por un lado, se tiñó la suspensión de nanopartículasen agua con 2% de ácido fosfotungstico, y se la visualizó utilizando unMicroscopio Electrónico de Transmisión (TEM). Por otro lado, se utilizó unMicroscopio Electrónico de Barrido (SEM). Para estudiar la internalización denanoPHB en células eucariotas, se prepararon nanopartículas cargadas con elfluoróforo FITC y se las incubó durante 1 hora con dos líneas celulares: Vero yTHP-1. Luego de lavados con tripsina, se analizaron las células por citometríade flujo. Resultados:Al visualizar las nanopartículas mediante las técnicas de SEM y TEM, seobservaron tamaños similares a los obtenidos mediante DLS. Adicionalmente, serealizaron mediciones de DLS de una suspensión de nanoPHB durante un mes. Losresultados demuestran que las nanopartículas no modificaron su tamaño duranteese tiempo, presentando una gran estabilidad coloidal. Por otro lado, se estudiópor citometría la internalización de nanoPHB en células eucariotas. Se observóque las células incubadas con nanopartículas cargadas con FITC presentaronmayor intensidad de fluorescencia que el control celular y que las célulasincubadas con nanoPHB sin fluoróforo (quienes, entre sí, no presentarondiferencias). Finalmente, encapsulamos estigmasterol en nanoPHB, una moléculaprecursora de uno de los antivirales que queremos analizar. El análisis por DLSde estas nanopartículas demostró que la encapsulación no produjo diferencias enel tamaño de las mismas. Conclusiones:En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo han permitido lacaracterización completa de las nanoPHB. Además, los ensayos preliminares deinternalización y encapsulación muestran un gran potencial para la utilizaciónde las nanoPHB como sistema de liberación de drogas antivirales.