Aplicación de un método colorimétrico para el estudio del efecto de lactobacilos sobre la adhesión de microorganismos a enterocitos

HUGO, A. A.; MINNAARD, J.; DE ANTONI. G.L; PÉREZ. P.F

Tucumán

Simposio; I Simposio Argentino-Italiano. Bacterias Lácticas. Aplicación en alimetos y Salud; 2002

CERELA

EI estudio de la interacción entre microorganismos y enterocitos es fundamental para comprender el efecto de la flora intestinal sobre el hospedador. Precisamente, uno de los mecanismos para explicar la accion probiótica atribuida a ciertos microorganismos, es la modificación de la capacidad de adherir a las células del epitelio intestinal. EI objetivo del presente trabajo fue implementar un método para evaluar el efecto de cepas probióticas sobre la interacción de microorganismos con enterocitos humanos en cultivo. Se utilizaron diferentes microorganismos G( +) y G( -) con actividad de nitrato reductasa. Como bacteria potencialmente probiótica se empleo Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis cepa CIDCA 133. La concentración de microorganismos no lácticos, se determinó mediante medidas de actividad nitrato reductasa a través de una reacción de diazotación-copulación. Los ensayos de adhesión se realizaron sobre enterocitos humanos (Iínea Caco-2). Las monocapas fueron incubadas con los microorganismos a 37°C. Luego de lavar y lisar los enterocitos, se realizó la determinación colorimétrica o el recuento de bacterias viables. Para los ensayos de exclusión/desplazamiento, las células se incubaron con el lactobacilo antes o después del agregado de Escherichia coli CM1. La mayoría de las cepas no lácticas estudiadas presentó una respuesta bifásica entre el nitrito producido y la concentración bacteriana. Este comportamiento es fundamental para el cálculo y podría deberse al carácter sigmoideo de la cinética de reducción de nitratos. Se encontró una gran diferencia entre los porcentajes de adhesión de las bacterias estudiadas, siendo Staphylococcus aureus ATCC 25923 la mas adherente. Para algunas cepas, los porcentajes de adhesión fueron mayores que los determinados por medio de recuentos de bacterias viables. La incubación de los enterocitos con suspensiones de la cepa CIDCA 133 disminuyó en gran medida la asociacion de E. coli a los enterocitos aun cuando las bacterias lácticas se agregaran luego del germen Gram-negativo. EI método colorimétrico basado en la actividad nitrato reductasa constituye una alternativa sencilla a los metodos tradicionales de determinación de adhesión de microorganismos a enterocitos. AI no verse afectado por la formación de agregados es superior, en algunos casos, a los métodos basados en recuentos de bacterias viables. Debido a que el género Lactobacillus no reduce nitratos, este método es ideal para estudios de competencia y exclusión.