Evaluación del efecto biológico de E. coli enterohamorrágica (O157: H7) en cultivos celulares

HUGO, A. A.; KAKISU, E.J; PÉREZ. P.F; DE ANTONI. G.L

Mendoza. Argentina

Jornada; XII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2006

Escherichia. coli enterohemorrágica (EHEC) está asociada a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Numerosos factores de virulencia han sido caracterizados en las cepas de EHEC siendo muy importantes la  toxina Shiga y la intimina. El objetivo del presente trabajo fue evaluar distintos aspectos del daño celular provocado por un aislado clínico de EHEC en cultivos celulares. Se usó Escherichia coli 69160 (O157:H7) aislada de un caso de SUH. Se emplearon las líneas Hep-2 y Vero. Las mismas se crecieron en medio DMEM a 37ºC en atmósfera con 5% de CO2. Las monocapas fueron incubadas con el sobrenadante del cultivo de EHEC con o sin microorganismos. La citotoxicidad se evaluó mediante tinción con cristal violeta y por incorporación de rojo neutro. La proliferación celular se cuantificó por reducción de MTT. Se determinó también el porcentaje de liberación de la enzima LDH. El daño por adhesión bacteriana se registró mediante tinción del citoesqueleto con faloidina fluorescente y por microscopía electrónica de barrido. El desprendimiento de células Vero evaluado por coloración con cristal violeta alcanzó un 50% en las concentraciones de sobrenadantes ensayadas. La proliferación disminuyó entre 50 y 80 % respecto al control según la dosis utilizada. La incorporación de rojo neutro disminuyó significativamente en las células tratadas con toxina y se registró una liberación de LDH de alrededor del 30 %. Las técnicas microscópicas realizadas en células Hep-2 permitieron registrar la lesión característica de  EHEC. Los resultados muestran la variedad de efectos biológicos producidos por una cepa de EHEC asociada a patología y la variedad de aproximaciones útiles para estudiar la virulencia de este patógeno.