Evaluación y caracterización de genes involucrados en la interacción de cultivares tolerantes y/o susceptibles de ajo (Allium sativum L.) al Allexivirus Garv-A

CELLI M; CONCI V; GIMENEZ M; GARCÍA LAMPASONA SC; STRUMIA G; MERINO MC

Defensa en plantas contra fitopatógenos

Ediciones INTA

Año: 2018; p. 28 - 29

Un complejo viral (Potyvirus, Carlavirus, Allexivirus) afecta a las plantaciones de ajo.Dentro de estos virus se mencionaron seis especies transmitidas por el ácaro Aceriatulipae. Dentro de los Allexivirus se han citado infectando ajo, Garlic virus A, B, C, D, E y X. Las interacciones incompatibles entre los virus y sus hospedantes han servido como modelo para investigar la repuesta de defensa. La mayoría de las interaccionesincompatibles están asociadas con el incremento de la expresión de genes PR y con la acumulación de proteínas mediadas por el ácido salicílico (SA). En general, se requiere un incremento en la producción de SApara que se produzca una acumulación dramática de trascriptos mRNAPR y de proteínas que ocurren como respuesta a una reacción de resistencia, pero no aparecen en las interacciones susceptibles. Sin embargo, se observan niveles basales de SA que no son alterados en las interacciones virus-huésped compatibles. El objetivo de esta línea de trabajo es estudiar la interacción GarVA-ajo y seleccionar materiales con resistencia o tolerancia a este virus con el propósito de caracterizar el o los genes que confieren resistencia al patógeno. En trabajos previos se registró que ajos de ´Castaño INTA´ presentaban escasa o ninguna infección conGarlic vírus A (GarV-A) a pesar de ser altamente susceptible a la infección con Aceria tulipae (Lunello et al., 2000). Se han descripto numerosos genes que están involucrados en los mecanismos de defensa frente a patógenos en plantas, entre los cuales se encuentran los genes de resistencia (genes R). Genes con estas características también han sido descriptos en ajo. En este proyecto experimental se propone evaluar los genes: AsRGA26, AsRGA29, AsRGA7, AsRGA6, AsRGA11 y AsRGA23 (Rout y col., 2014) en plantas susceptibles y tolerantes al patógeno. Para ellose está trabajando en primera instancia con los oligosAsRGA29 yAsRGA11, ajustando las condiciones de las reacciones para qRT-PCR. En base a trabajos preliminares estamos desarrollando un modelo biológico que involucra el uso de plantas libres de virus de ajo susceptible y ´Castaño INTA´ tolerante a virus. Para ello se están produciendo plantas libres de virus mediante el cultivo de meristemas. Las mismas son evaluadas mediante pruebas serológicas, microscopia electrónica y moleculares quepermitan establecer su estado sanitario previo a la inoculación del virus. Paralelamente el aislamiento de GarV-A fue obtenido por reinoculación de lesiones locales a plantas de Chenopodium murale y re transmitido a plantas de ajo libres de virus para su multiplicación masiva. Cuando las plantas de ´Castaño´ libres de virus estén rusticadasy adaptadas a la condición ex vitro, serán inoculadas con la cepa viral. Se extraerá parte de una hoja joven a las 2, 4, 6 y 12 horas y luego una vez por día, durante 10 días posteriores a la inoculación, para la detección de los genes involucrados en la respuesta de defensa. Paralelamente se realizará la misma prueba con ajos susceptible a estevirus. Debido a lo complejo que resulta obtener un número importante de plantas que cumplan con estas condiciones y para dar continuidad al trabajo propuesto decidimos avanzar con la idea que nos planteáramos al inicio de esta línea. Para ello, a partir de plantas provenientes de cultivo in vitro y plantas de cultivo en campo obtenidas luego de 3 años sucesivos de cultivo, se extrajo ARN de 2 réplicas biológicas, se cuantificó y se acondicionó para realizar un análisis de RNA seq. De esta manera evaluaremos los genes que se expresan en ambas condiciones de cultivo.