Establecimiento del cultivo in vitro de cardo mariano para la producción de biomasa

CIMINO, C.; VAIRO CAVALLI, S.; SPINA, F.; NATALUCCI, C.L.; PRIOLO, N.

Buenos Aires

Simposio; BAIRES BIOTEC 2005; 2005

REDBIO

Introducción La mayoría de las enzimas comercialmente utilizadas han sido obtenidas principalmente de fuentes microbianas. Enzimas derivadas de plantas tales como peptidasas cisteínicas (papaína, bromelaína y ficina) se usan actualmente en diversos procesos industriales y en medicina (Uligh, 1998). Las flores de distintas especies de cardos se caracterizan por producir peptidasas aspárticas con actividad coagulante de leche (Veríssimo et al., 1996; Llorente et al., 2004), lo que es aprovechado para la producción de quesos. El objetivo del presente trabajo ha sido la optimización de las condiciones de cultivo in vitro para la producción de callos de Silybum marianum (Asteraceae), cuyo nombre vulgar es cardo mariano, como potencial fuente de proteinasas coagulantes de leche.   Metodología Para el establecimiento de los callos se utilizaron como explantos secciones de cotiledones previamente desinfectados mediante un lavado con etanol 70o seguido de un lavado con NaClO al 10% p/v y Tween 20 al 0,05% v/v durante 15 minutos con agitación. Posteriormente fueron enjuagados 3 veces con agua destilada estéril. Para la introducción de los explantos se utilizó el medio base B5 suplementado con 0,05 mg/l de BA (benciladenina) y 0,5 mg/l de 2,4-D (ácido diclorofenoxiacético) solidificado con 2,5 g/l de fitagel.   Se ensayaron dos medios de cultivo sólidos utilizando el medio base B5 suplementado con reguladores de crecimiento ANA (ácido naftalenacetico), BA y 2,4-D (Tabla 1). Los callos se hicieron crecer a 25 oC durante 45 días y en oscuridad.   Tabla 1.- Concentraciones de reguladores de crecimiento ANA, BA, 2,4-D en ppm   Medio ANA BA 2,4-D S1 - 0,050 0,50 S2 0,01 0,025 -   Una vez establecidos los callos, se estudió su cinética de crecimiento.   Resultados y Discusión Con el tratamiento de desinfección utilizado se obtuvo un 63% de supervivencia. De acuerdo al estudio de la cinética de crecimiento en el medio S1 se observó una típica curva de crecimiento. La fase exponencial comenzó a los 14 días de cultivo en tanto que la fase estacionaria se alcanzó a los 35 días. La velocidad de crecimiento durante la fase exponencial fue de 0,005 g (peso seco)/día, con un coeficiente de correlación de 0,99 (Figura 1). Por el contrario en el medio S2 el crecimiento fue muy lento (Figura 2) produciéndose además rizogénesis a partir de la quinta semana.  Conclusiones A partir de estos resultados, concluimos que el medio de cultivo más apropiado para el establecimiento de callos Silybum marianum lo constituye el medio suplementado con BA y 2,4-D.  Referencias bibliográficas Llorente, B., Brutti, C. y Caffini, N.O. (2004). Journal of Agricultural and Food Chemistry 52: 8182-8189. Uhlig, H. (1998) In: Industrial enzymes and their applications. Willey & Sons, Nueva York, p. 1-11, 146-179. Veríssimo, P., Faro, C., Moir, A., Lin, Y., Tang, J. y Pires, E. (1996). European Journal of Biochemistry 235: 762-768.