Criopreservación de semillas de cítricos.

GRAIVER NATALIA, CALIFANO ALICIA, ZARITZKY NOEMÍ

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2011

Asociación Argentina de Tecnólogos Alimentarios

La semilla es el principal órgano reproductivo de la mayoría de las plantas superiores; su almacenamiento constituye una manera de mantener viable por largos periodos el germoplasma. Se reconocen tres categorías de semillas: ortodoxas, recalcitrantes e intermedias. Las ortodoxas pueden ser desecadas hasta contenidos de humedad muy bajos sin sufrir daños; su longevidad aumenta cuando disminuye el contenido de humedad (CH) y la temperatura. En contraste, las semillas recalcitrantes no pueden ser desecadas por debajo de un CH relativamente alto sin causarles daño. Las semillas intermedias presentan cierta sensibilidad a la desecación y su viabilidad se reduce a bajas temperaturas; estas semillas no pueden ser almacenadas en nitrógeno líquido (NL) sin un proceso de deshidratación parcial previo. Las semillas de cítricos pertenecen a la categoría intermedias y su CH en el momento de la inmersión en NL debe considerarse como el factor más crítico en la criopreservación. Los objetivos de este trabajo fueron: a) investigar el CH óptimo para la criopreservación semillas de cítricos (Citrus sinensis, Citrus paradisi, Citrus reticulata var.Criolla y Citrus reticulata var.Dancy), analizando su viabilidad, b) determinar la relación entre el contenido en lípidos de las semillas y su contenido de agua no congelada; c) establecer las relaciones entre la humedad relativa de equilibrio (RH%), el CH de las semillas, la presencia de agua congelable y el porcentaje de germinación después de la inmersión en NL. El contenido lipídico de las semillas analizadas se cuantificó por Soxhlet obteniéndose valores comprendidos entre 33.6 y 43.5 % en base seca. Por una parte se analizó la tolerancia de las semillas a la deshidratación exclusivamente y por otro a la deshidratación y posterior exposición a NL. Para estudiar la tolerancia a la deshidratación las semillas fueron desecadas a 20ºC con soluciones salinas saturadas que proporcionan ERH entre 11 y 95%. Las semillas deshidratadas fueron colocadas en condiciones de germinación, la cual se realizó sobre arena húmeda en cajas plásticas cerrada a 25ºC. El CH de las semillas en el equilibrio (expresadas como gH2O/gbase seca) se determinó gravimétricamente en estufa de secado a 103ºC hasta peso constante. Se modelaron las isotermas de sorción utilizando el modelo simplificado de D´arcy?Watt y el de GAB. Para el estudio de la factibilidad de criopreservación, las semillas, una vez deshidratadas en las condiciones descriptas anteriormente, fueron envueltas en papel de aluminio y sumergidas en NL. Las semillas congeladas fueron luego sumergidas en un baño de agua a 37ºC previo al test de germinación. Asimismo se determinaron los termogramas mediante calorimetría diferencial de barrido (DSC) en los tejidos del cotiledón de las especies testeadas a diferentes contenidos de humedad para cuantificar la entalpía de fusión del hielo y la cantidad de agua no congelable. Se analizaron también por DSC muestras del extracto lipídico de semillas para identificar las transiciones de lípidos en los termogramas. Se observó que el límite recomendable de deshidratación de las semillas de cítricos previo al tratamiento con NL se corresponde con el contenido de agua no congelada del tejido, lo que confirma que para lograr la supervivencia de las semillas criopreservadas se debe evitar la formación de hielo intracelular.