Clostridioides difficile: relevamiento de toxinotipos circulantes en centros del sistema de salud pública. HIGA GANDULFO - HIGA ROSSI

TREJO FERNANDO MIGUEL; CARASI PAULA; CRIVARO ANDREA; SOLDAVINI PELICHOTTI, PC; BENGOA, A; HUGO, A; BENENCIA, ME; GODOY, A; PÉREZ, F; BARIDONI, MDLA; MORENO VALERO, Ó; ARREGUI, L; ALUL, E FACENTE,A; SALTO, I; SERRADELL, MDLA; PÉREZ, PF

Buenos aires

Congreso; VII Congreso de enfermedades endemoepidémicas del hospital de infecciosas Francisco. J. Muñiuz; 2019

Hospital Muñiz

La falta de datos epidemiológicos en nuestro país, nos llevó a evaluar los toxinotipos de C. difficile circulantes y establecer la prevalencia característica en dos centros de salud públicos. Para ello, se estudiaron muestras de materia fecal (período 2016-2017) con diagnóstico positivo para C. difficile provenientes del HIGA Gandulfo (positivas por EIA contra las toxinas) y del HIGA Rossi (positivas por in house-qPCR contra TcdB,). A partir de estas muestras se obtuvieron aislamientos que se caracterizaron según el protocolo de Rupnik modificado (Rupnik et al., 1997). Mediante PCR se determinó la presencia de la isla de toxicidad PaLoc y de tcdA, tcdB, cdtA o cdtB. Para la toxinotipificación por PCR-RFLP, se utilizaron los primers B1 y A3 que reconocen regiones de los genes que codifican para tcdB y tcdA respectivamente. Los productos obtenidos para B1 y A3 fueron digeridos con las enzimas de restricción HincII (B1), AccI (B1) y EcoRI (A3) y sus perfiles electroforéticos se compararon con referencias conocidas (Rupnik et al, 1997; Rupnil et al., 2016). El daño celular se evaluó mediante ensayo de citotoxicidad sobre células Vero en cultivo a partir de los sobrenadantes obtenidos de cultivos en BHI de los aislamientos obtenidos. Como referencia se empleó la cepa VPI 10463 (hiperproductora de toxinas, toxinotipo 0). Se obtuvieron 26 aislamientos provenientes del HIGA Gandulfo, compatibles con C. difficile por morfología de colonia y microscopía, 20 de los cuales fueron toxigénicos (confirmado por ensayo de citotoxicidad). Procedentes del HIGA Rossi se obtuvieron 14 aislamientos de los cuales 13 fueron toxigénicos.En ambos centros la prevalencia de infecciones por C. difficile fue del 8,5%. Todos los aislamientos toxigénicos provenientes de Gandulfo o Rossi, fueron tcdA+/tcdB+ y dos, provenientes del HIGA Rossi, también portaron el gen que codifica para el componente B de la toxina binaria (cdtB). Los resultados obtenidos por RFLP y ensayos de citotoxicidad permitieron establecer los siguientes toxinotipos: 1) HIGA Rossi, [0(n=4); 0/v (n=1); III (n=1) y VIII (n=7)] 2) HIGA Gandulfo: [I(n=1); 0 (n=2) y VIII (n=17)]. El toxinotipo VIII fue el de mayor prevalencia seguido por toxinotipo 0, ambos presentes en los centros de salud estudiados. Los toxinotipos 0/v y III son positivos para toxina binaria. Si bien el toxinotipo III porta el gen tcdA, la toxina TcdA no es detectada por inmunoblotting. A pesar de que no existe una relación directa entre el toxinotipo con la presentación o severidad del cuadro clínico o con la población de riesgo, el mayor número de infecciones registradas actualmente en humanos se asocia a cepas de C. difficile pertenecientes los toxinotipos III, IV, V y VIII (Persson et al. 2011). Estos toxinotipos, además se relacionan con una mayor patogenicidad de las cepas y con una alta frecuencia de recaídas (Rupnik el al., 2008). El presente trabajo es el primer relevamiento de toxinotipos circulantes en nuestro país. Esta caracterización, junto a un sistema de vigilancia, contribuirá a comprender patrones de infección, establecer estrategias para el control y tratamiento en infecciones asociadas a C. difficile y mejorar métodos de detección para el diagnóstico del patógeno.