Interacción de lactobacilos con diferente suceptibilidad a defensinas humanas con células fagocíticas.

SZYMANOWSKI, F. ; HUGO, A. A. Y PÉREZ, P. F.

Jornada; XVII Jornadas Argentinas de Microbiología y Jornadas Bioquímicas del Sur Argentino.; 2017

Las células fagocíticas juegan un papel esencial en la inmunidad y constituyen un nexo entre la respuesta inmune innata y adquirida. La actividad de las células fagocíticas es crucial para disminuir la carga bacteriana en el sitio de infección y para el procesamiento y la presentación de antígenos. Las bacterias ácido lácticas (LAB) constituyen parte del microbioma intestinal y son capaces de modular las respuestas de las células fagocíticas. Las LAB pueden presentar distintas propiedades de adaptación al entorno gastrointestinal (resistencia a la bilis, al pH ácido, a los péptidos catiónicos intestinales, capacidad de adhesión al mucus o epitelio intestinal) que podrían correlacionarse con un diferente perfil de respuesta de las células fagocíticas en su interacción con las LAB. Las β defensinas humanas (HBDs) son péptidos antimicrobianos catiónicos secretados por células epiteliales de diferentes mucosas que también presentan actividad inmunomodulatoria. En el presento trabajo se estudió la fagocitosis y el destino intracelular de dos lactobacilos con diferente suceptibilidad a las β defensinas humanas en interacción con células fagocíticas en cultivo. Se utilizaron las cepas Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis CIDCA 133 (resistente a HBD) y L. delbrueckii subsp. bulgaricus CIDCA 331 (sensible a HBD) junto con células monocíticas THP-1 humanas diferenciadas con acetato de forbol miristato (PMA). La asociación e internalización de las LAB se evaluó por citometría de flujo y recuento de viables. La localización intracelular se determinó mediante microscopia confocal con bacterias marcadas con FITC y posterior marcación de lisosomas (compartimentos ácidos) con Lysotracker. La asociación e internalización evaluadas por citometría de la cepa CIDCA 133 fue mayor que la cepa CIDCA 331 en todas las concentraciones bacterianas ensayadas. Los porcentajes de asociación evaluados por recuento de la cepa CIDCA 133 correlacionaron con los datos de citometría. La supervivencia intracelular de ambos lactobacilos fue muy baja (alrededor de 0.1%) respecto a las bacterias asociadas. La supervivencia de la cepa CIDCA 133 duplicó los porcentajes respecto de la cepa CIDCA 331. La evaluación de la internalización por microscopia confocal reveló que ambos lactobacilos se dirigen a compartimentos ácidos y se observan evidencias de fragmentación intracelular. Comparativamente la internalización y supervivencia intracelular de lactobacilos de menor tamaño como L. plantarum CIDCA 83114 fue significativamente más alta. Posiblemente las dimensiones de los lactobacilos en estudio influyan en su fagocitosis y procesamiento. Los resultados demuestran que aunque ambas cepas estudiadas son dirigidas a compartimentos ácidos luego de la internalización, la cepa CIDCA 133 que es más resistente a las β defensinas humanas, presenta una mayor internalización y supervivencia intracelular dentro de macrófagos humanos en cultivo (células THP-1).