Efecto de los componentes del medio de cultivo en la producción de sustancias tipo bacteriocinas

ASTESANA D.M.; BLAJMAN J.E.; FUSARI M.; BERISVIL A.; FRIZZO, L.S.; SOTO, L.P.; ZBRUN, M. V.; SEQUEIRA, G.J.; SIGNORINI, M.L.; ROSMINI, M.R.

Jornada; XV Jornadas de Divulgación Técnico Científicas 2014; 2014

Introducción: Lasbacteriocinassonproteínasopéptidosproducidosporalgunasbacteriasqueporlogeneralproduceninhibiciónsobrebacteriasqueestánestrechamenterelacionadasconlacepaproductora1.Loscomponentesdelmediodecultivopuedeninfluirmodificandolaproduccióndebacterocinasporpartedelasbacteriasácidolácticas(BAL). Objetivos: Elpropósitodeéstetrabajofueevaluarlaproduccióndesustanciasinhibitoriastipobacteriocinasutilizandodiferentesmediosdecultivo,endondevariabalacomposicióndesuscomponentesprincipales. MaterialesyMétodos: Parallevaracaboeltrabajoseutilizaronlosmedios,TGE(CaldoTriptonaGlucosa)modificado,CGB(CaldoCaseínaGlucosa)yMRS(deMan,RogosaySharpe)condiferentesmodificaciones.LacomposicióndelTGEmodificadofueProteosaPeptona1%,Glucosa1%,Extractodelevadura1%,Sulfatodemagnesio0,005%,Sulfatodemanganeso0,005%,Agar1,5%,Tween800,1%,pH6,8.LacomposicióndeCGBfueProteosaPeptona2%,Glucosa1%,Extractodelevadura0,5%,Citratodeamonio0,2%,Fosfatodisódico0,2%,Sulfatodemagnesio0,01%,Sulfatodemanganeso0,005%,Agar1,5%,Tween800,1%,pH6,8.LacomposicióndelMRSfuePeptona1%,Glucosa2%,Extractodelevadura0,4%,Extractodecarne0,8%,Acetatodesodio0,5%,Citratodeamonio0,2%,Fosfatodipotásico0,2%,Sulfatodemagnesio0,02%,Sulfatodemanganeso0,005%,Tween800,1%,pH6.5.AdemássemodificólafuentedecarbonodelMRSreemplazándosepormaltosa(MRS1)ysacarosa(MRS2).TambiénseutilizóMRSsintween80(MRS3).LascepasqueseutilizaronformanpartedelcepariodelLaboratoriodeAlimentosdelDepartamentodeSaludPública,FCV,UNLyfueronaisladasdelamicrobiotaintestinaldeternerosjóvenes.LascepasconactividadantimicrobianaenestudiofueronPediococcusacidilacticiDSPV66T,P.acidilacticiDSPV69TLactobacillusplantarumDSPV106T2.LacepatapizutilizadafueEnterococcusfaeciumDSPV22T.LasbacteriasfuerondescongeladasysembradasenplacasdemedioMRSyseincubarona37°Cdurante48a72h.Latécnicadedifusiónenagarseutilizóparadeterminarlaproduccióndesustanciasinhibitoriastipobacteriocinas.Paraestosetomóunacoloniadelaplaca,serepicóen4mldecaldodelosdiferentesmediosyseincubóa37°Cdurante16h.Luegoserepicóentubosfalconcon10mldecaldodelosdiferentesmediosyseincubóa37ºCa16h.Posteriormenteseprocedióacentrifugarparaextraerelsobrenadanteoextractolibredecélulas(ELC).AcontinuaciónsemodificóelpH,agregandohidróxidodesodio3M,llevándoloaunvalorentrelos6y6,5paraobtenerelELCneutralizado(ELCN).LosELCNseesterilizaronporfiltraciónyseconservaronenfreezera-20°Chastasuutilización.Posteriormentesobreunaplacaquecontenía10mldemedioMRSsólidoseadicionaron8mldemedioMRSsemisólidoquepreviamenteseinoculócon40μldeuncultivofresco(overnight)delacepaindicadora.Sedejósolidificaryserealizaronhoyosde5mmdediámetrodondesedepositaron25μldelELCN.Lasplacassellevarona5°CduranteunahoraparapermitirquelosELCNpuedandifundiratravésdelagar.Despuésseincubaronlasplacasenestufaa37°Cdurante24hyseobservólapresenciaoausenciadezonasdeinhibicióndecrecimientobacteriano.Todaslasdeterminacionesserealizaronportriplicado. Figura1.PlacadeagarMRSconE.faeciumDSPV22tcomocepatapiz.PresenciadehalosdeinhibiciónparalosELCNdelacepasP.acidilacticiDPSV69T,P.acidilacticiDSPV66Ty L.PlantarumDSPV106T. Resultados: ParalacepaP.acidilacticiDSPV66Tseobservaronhalosde2mmdediámetroyparalacepaP.acidilacticiDSPV69Tseobservaronhalosde2,5mmdediámetroentodoslosmediosconlaexcepcióndeMRS1yMRS2dondenoaparecieronhalosendosdelastresréplicas.ParalacepaL.plantarumDSPV106Tseobservaronhalosde1,5mmenlastresréplicasdelosmediosTGE,CGB,MRS1yMRS2,perosólomanifestóhaloenunadelasreplicaenMRS.Laausenciadetween80nomodificólaproduccióndesustanciastipobacteriocinas. Discusiónyconclusiones: Sibienresultadificultosoestablecersialgunodelosmediosmostrómayorproduccióndesustanciasantimicrobianas,enlosmediosCGB,MRS1yMRS2lascepasprodujeronlassustanciasinhibitoriasenformamásconstanteypredecibleyporlotantopodríanserdeelecciónenlostrabajosfuturossobreproduccióndelassustanciasparasupurificación. Referencias: 1.Klaenhammer, T.R. Bacteriocinsof lacticacidbacteria. Biochimie70: 337-349. 1988. 2.Astesana, D.M.;Blajman, J.E.; Fusari, M.L.; Frizzo, L.S.; Soto, L.P.;Zbrun, M.V.; Sequeira, G.J.; Signorini, M.L.; Rosmini, M.R. Comparación de técnicas para la detección de bacteriocinas. In XIV jornada de divulgación técnico científica 2013, Universidad Nacional de Rosario, Rosario, 31-32, 2013.