Estabilización de proteínas mediada por polietilenimina de bajo peso molecular

MAZZAFERRO, LAURA; PIÑUEL, LUCRECIA; MINIG, MARISOL; BRECCIA, JAVIER D.

Trelew, Chubut

Jornada; I Jornadas Patagonicas de Biologia; 2009

Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> A pesar de los recientes avances en ingeniería de proteínas para mejorar la estabilidad, el uso de compuestos químicos solubles como excipientes todavía se practica ampliamente. Esto resulta básico para las proteínas terapéuticas, las cuales deben estar en su forma natural. Por lo tanto, el conocimiento del efecto de distintos estabilizantes continúa siendo un tópico de gran interés en el diseño de formulaciones proteicas. En el presente trabajo se realizó la evaluación de la estabilidad de siete proteínas modelo en presencia de polietilenimina de bajo peso molecular (PEI, PM 2000 Da). La estabilidad termodinámica en presencia de 0.10 % P/V PEI2000 se determinó por espectroscopia de dicroísmo circular (CD). La cuantificación de las estructuras secundarias de las proteínas básicas –lactato deshidrogenada de músculo, ribonucleasa A, lizosima y cutinasa– fueron esencialmente las mismas en presencia del polímero. En el caso de las proteínas ácidas –hormona de crecimiento humana, seroalbúmina humana y lactato deshidrogenada de corazón– la intensidad de la señal en los espectros disminuyó debido a una separación de fases. Se encontró una correlación directa entre el peso molecular de las proteínas ácidas y la concentración de PEI2000 requerida para una máxima floculación. La separación de fases se relacionó con el número de patches negativos en la superficie de la proteína, y no con el número total de los residuos aminoacídicos negativos. Por otro lado durante la desnaturalización térmica, en los barridos de temperatura, el policatión no tuvo un efecto importante en la temperatura de fusión (Tm) de las proteínas básicas mientras que para las ácidas hubo una disminución de entre 6-23 °C. A pesar de este comportamiento, PEI2000 mostró protección de LDH de corazón cuando ésta fue sometida a estrés oxidativo.