Kefiran: Antagonismo de los efectos asociados a la interacción de Bacillus cereus con enterocitos humanos en cultivo

MEDRANO M; HAMET M F; ABRAHAM A. G.; PÉREZ P. F.

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso CYTAL y 2º Simposio Internacional de Nuevas Tecnologías; 2007

AATA

Bacillus cereus es un microorganismo G(+) que frecuentemente contamina alimentosdebido a su capacidad de formar esporos. La síntesis de diversas toxinas (producidastanto en el alimento como en el intestino) causan en el hombre dos tipos de síndrome:emético y diarreico. El kefiran es un glucogalactano ramificado hidrosoluble (PMmayor a 107 Da) producido por los microorganismos presentes en gránulos de kefir.Debido a las uniones que presenta, no puede ser digerido por enzimas gástricas, con locual podría llegar intacto al intestino.En estudios anteriores hemos demostrado que el kefiran es capaz de proteger enterocitoshumanos en cultivo del efecto citopático asociado a la presencia de toxinas ensobrenadantes de cultivo de B.cereus. Dado que la capacidad del bacilo de adherirse aepitelio intestinal constituye un factor adicional de virulencia, el objetivo del presentetrabajo fue evaluar si la presencia de kefiran interfiere en la adhesión del bacilo a losenterocitos así como también en el efecto citopático asociada a dicha interacción.Se utilizó kefiran de gránulo extraído mediante precipitación con etanol, en unaconcentración de 800 mg/L. Se emplearon enterocitos diferenciados de la línea Caco-2,incubados durante diferentes tiempos (de acuerdo al efecto citopático evaluado en cadacaso) con células vegetativas de B. cereus cepa B10502 en presencia y ausencia dekefiran. Para cuantificar el número de bacilos adheridos después del tratamientos serealizaron recuentos en placa. Las células intestinales se tiñeron con la técnica de MayGrumwald-Giemsa para observar alteraciones morfológicas. Para observardesorganización del citoesqueleto se tiñeron con FITC-faloidina. Se realizó unamicroscopía electrónica de barrido. Se cuantificó el porcentaje de los enterocitos quepermanecieron adheridos luego de la infección mediante coloración con cristal violeta.Se evaluó el grado de necrosis mediante tinción de núcleos con ioduro de propidio. Laintegridad de los enterocitos se evaluó por cuantificación de la enzima lactatodeshidrogenasa mitocondrial liberada al medio.La presencia de kefiran disminuyó el número de bacilos adheridos. El contacto bacilocélulacondujo a desorganización del citoesqueleto, alterando la morfología de losenterocitos (redondeo, desprendimiento, desaparición de microvellosidades) así como lainducción de necrosis. La presencia de kefiran disminuyó notablemente estos efectos.El kefiran estaría interfiriendo en la adhesión del bacilo a los enterocitos, disminuyendoel efecto biológico asociado a este factor de virulencia.Estos resultados, unidos a la acción ya demostrada sobre el efecto de los factoresexocelulares, evidencian una nueva aplicación de los exopolisacáridos bacterianos paraantagonizar patógenos alimentarios relevantes en el contexto de infecciones intestinales.