Kefiran como antagonista de efectos adversos asociados a Bacillus cereus.

MEDRANO, M.; HAMET, M.F; PÉREZ P.F,; ABRAHAM, ANALIA G

San Mighel deTucumán

Congreso; II Simposio Internacional de Bacterias lácticas. Primer encuentro Red BAL Argentina.; 2006

cerela

El kefiran es un exopolisacárido ramificado, hidrosoluble, presente en gránulos de kefir o en sus productos fermentados. Debido a las uniones que presenta, no puede ser digerido por enzimas gástricas, con lo cual podría llegar intacto al intestino. Bacillus cereus es un microorganismo G (+), esporulado.  Sus exotoxinas (hemolisinas, fosfolipasas, cereolisina O (CLO), cereulide, entre otras) provocan en el hombre dos tipos de síndrome: emético y diarreico. Estas toxinas pueden preformarse en el alimento contaminado o ser sintetizadas en el intestino, al cual el bacilo tiene la capacidad de adherirse. Esta adhesión ha sido postulada como un mecanismo adicional de patogenicidad. En los últimos años ha aumentado el interés en los exopolisacáridos bacterianos por su aplicación en alimentos funcionales; por ello se ha planteado como objetivo el estudio del efecto del kefiran obtenido de gránulos como antagonista de los mencionados mecanismos de virulencia de B cereus in vitro. Para evaluar la actividad de los factores extracelulares de B.cereus (cepa B10502) se utilizaron sobrenadantes (SN) de cultivo crecidos en BHI 16 h. a 32ºC. Como modelo de toxinas formadoras de grandes poros se utilizó estreptolisina O (SLO) comercial. Para estudiar el efecto de la interacción célula-célula se utilizaron cultivos bacterianos de 3 h.  Como indicadores de actividad biológica se emplearon eritrocitos y enterocitos en cultivo (Caco-2). En eritrocitos se determinaron cinéticas de hemólisis. En células intestinales se evaluó: desprendimiento (cristal violeta), actividad deshidrogenasa mitocondrial (MTT), núcleos necróticos (ioduro de propidio), citoesqueleto (FITC-faloidina),  tinción May Grümwald-Giemsa y microscopía electrónica de barrido (SEM). Los SN provocaron el desprendimiento de los enterocitos y disminuyeron la actividad deshidrogenasa mitocondrial, siendo ambos parámetros medida directa del daño celular. La presencia de kefiran (200 a 800 mg/L) disminuyó el porcentaje de desprendimiento y mantuvo la actividad deshidrogenasa en niveles cercanos a los controles. Por SEM y  tinción con Ioduro de propidio se observaron alteraciones morfológicas en las células y un alto porcentaje de necrosis, siendo ambas alteraciones disminuidas en presencia de kefiran. La  hemólisis (con SN o con SLO) disminuyó significativamente en presencia de kefiran. El contacto bacilo-célula condujo a desorganización del citoesqueleto, alterando la morfología de las células (redondeo, desprendimiento, desaparición de microvellosidades) así como la inducción de necrosis. La presencia de kefiran disminuyó notablemente estos efectos. Si bien es necesario profundizar en los mecanismos que están implicados en estas observaciones, se puede concluir que el kefiran está interfiriendo en los mecanismos responsables del daño que produce B.cereus sobre células eucarióticas. Parte del antagonismo frente a factores extracelulares sería debido a la interferencia con la acción de toxinas formadoras de grandes poros.