Interacción de proteínas de capa-s de lactobacillus kefir Cidca 8321 con Salmonella enterica serovar enteritidis. Alimentos

GOLOWCZYC M.A,; MOBILI P; GARROTE G.L,; ABRAHAM, ANALIA G; DE ANTONI G L

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología; 2006

Asociacion Argentina de Microbiologia

Salmonella es uno de los microorganismos patógenos más estudiados y caracterizados. Salmonella enterica serovar Enteritidis es una de las principales causas de infecciones intestinales en humanos. Este microorganismo es capaz de adherir e invadir muchos tipos celulares, para lo cual utiliza fimbrias y numerosas proteínas. Muchos estudios muestran la acción protectora de las bacterias ácido lácticas sobre Salmonella. Lactobacillus kefir es un microorganismo GRAS potencialmente probiótico, y su superficie está cubierta por capa-S, un arreglo cristalino de subunidades proteicas. Las proteínas de capa-S, secretadas al medio de cultivo o extraídas con agentes caotrópicos,  tienen la capacidad de auto-ensamblarse sobre distintas superficies biológicas. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la inhibición de la invasión de Salmonella a enterocitos en cultivo producida por L. kefir CIDCA 8321 es debida a una interacción directa entre la proteína de capa-S y el patógeno. L. kefir CIDCA 8321 se aisló de gránulos de kefir y fue seleccionada por su capacidad de coagregar con Salmonella. Fue crecida en caldo MRS durante 48 hs, y el sobrenadante (SN) de cultivo se obtuvo por filtración. La proteína de capa-S fue extraída de la bacteria con LiCl 5 M, dializada y liofilizada. Salmonella enterica serovar Enteritidis fue aislada de una muestra clínica y crecida en caldo nutritivo durante 18 hs. Para los ensayos de adhesión e invasión se usaron células Caco-2/TC-7 de crecimiento confluente. Al evaluar el efecto de la coagregación en la interacción de Salmonella con enterocitos in vitro se observó que, mientras que la coincubación de Salmonella con L. kefir CIDCA 8321 produce una disminución significativa de la invasión, el efecto protector se pierde cuando a L. kefir se le extrae la proteína de capa-S.  Por otra parte, la proteína de capa- S extraída de la superficie de L. kefir 8321 mostró un efecto inhibitorio dosis-respuesta sobre la invasión de Salmonella.  La preincubación (1h, 37ºC) de Salmonella con SN de cultivo de L. kefir causó una disminución significativa de su adhesión e invasión a células en cultivo. Se observó que la proteína de capa-S es la proteína predominante en el SN de L. kefir. Por Dot-Blot, usando antisuero específico anti capa-S de L. kefir, se detectó proteína de capa-S asociada a la superficie de la Salmonella pretratada con el SN. Por último, mediante microscopía electrónica de barrido se observó que Salmonella preincubada con proteínas de capa-S forma agregados. Se concluye que la formación de agregados por asociación entre Salmonella y la proteína de capa-S de L. kefir CIDCA 8321 impediría la interacción del patógeno con el epitelio intestinal pudiendo prevenir posibles infecciones.