Estudio del efecto antagónico de lactobacilos y sus paredes contra la acción de Escherichia coli enterohemorrágica (O157:H7) en cultivos celulares

KAKISU, E. J.; HUGO, A.; PÉREZ, P. F; ABRAHAM, ANALIA G; DE ANTONI, G. L

Biuenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino Microbiología.; 2006

Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) es un patógeno de importancia a la Salud Pública y asociado a enfermedades transmitidas por alimentos. Las EHEC son productoras de brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Uno de sus factores de virulencia es la toxina shiga, la cuál es capaz de interrumpir la síntesis protéica en las células eucariotas que contienen el receptor específico (glicolípido Gb3). Es conocida, en el área de los alimentos probióticos, la acción antagónica de ciertos lactobacilos frente a cepas de patógenos intestinales. El objetivo del presente trabajo fue investigar el efecto protector de varias cepas de lactobacilos frente al daño provocado por factores extracelulares de E.coli (EHEC) en cultivos celulares de la línea Vero. La cepa 69160 de E. coli (O157:H7) utilizada para los experimentos fue aislada de un caso de SUH. Las bacterias lácticas empleadas fueron aisladas de leche y de kefir: Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis (cepa CIDCA 133) y subsp. bulgaricus (cepa CIDCA LBR), Lb. plantarum (cepa CIDCA 83114 y 8336) y Lb. kefir (cepa CIDCA 8348 y 83113). Las células de la línea Vero fueron crecidas en medio DMEM a 37ºC en atmósfera con 5% de CO2. Para los ensayos de citotoxicidad, se inoculó el sobrenadante del cultivo de EHEC sobre las monocapas celulares con y sin incubación con los lactobacilos o sus paredes. Se determinó la viabilidad por incorporación de rojo neutro a los lisosomas, la proliferación celular por medición de la reducción de sales de tetrazolium (MTT) y la integridad celular por medición de la liberación de lactato deshidrogenada (LDH). Los resultados mostraron un aumento de hasta el 40% de la proliferación con las cepas homofermentativas 83114 y 8336, y un 25% más de viabilidad cuando se determinó la incorporación de rojo neutro en las monocapas coincubadas con las cepas 133, 8336 y 83114. Del mismo modo, con la presencia de los lactobacilos 133, 83114 y 8336, la proporción de LDH liberada fue notoriamente menor en relación al daño producido por la EHEC. Cuando se probaron las paredes de las cepas 83114 y 133 la respuesta antagónica fue similar a la acción del microorganismo entero. Nuestros resultados evidenciaron la acción antagónica de algunas cepas de lactobacilos frente a E. coli EHEC y se pudo vislumbrar la importancia de las paredes en los mecanismos de inhibición del efecto de las toxinas del enteropatógeno.