Identificación de Canales Transportadores de Agua en Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

TYMCZYSZYN E.; DAMIANO A.; TAUROZZI M.; DISALVO E.A.

Mar del Plata - Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas, SAIC-SAI-SAFE-SAB-SAB- SAN-SAF; 2004

Se ha estudiado el cultivo de Lactobacillus bulgaricus en medio de alta osmolaridad con el objetivo de pretratar a las células para que sean mas resistentes al estrés hídrico. Como resultado de estos estudios se ha encontrado, que el crecimiento a bajas actividades de agua, las bacterias presentan una menor permeabilidad de membrana que las bacterias crecidas en medio base. Una de estas adaptaciones podría involucrar la presencia de canales transportadores de agua, como las acuaporinas. Estas pertenecen a una familia de proteínas intrínsecas de membrana que funcionan como canales de agua. Presentan una región altamente conservada flanqueada por la secuencia consenso, asparagina-prolina-alanina (NPA). Con estas evidencias se estudió la permeabilidad a través de cambios de volumen frente a un shock osmótica, en presencia y ausencia de inhibidor (HgCl2) a 3 y 0.3 mM. Estas concentraciones no produjeron alteraciones sobre la viabilidad o el potencial superficial de las bacterias. El estudio de la permeabilidad en presencia de estas concentraciones de mercurio demostraron una inhibición progresiva en el transporte de agua en función del tiempo de incubación con el inhibidor. Por técnicas de RT-PCR utilizando primers que flanquean la zona NPA-NPA conservada en todas las AQPs observamos una banda de aproximadamente 500 pb. Los estudios de Western blot utilizando un anticuerpo policlonal anti AQP1 (AQP que presenta una elevada homología con las AQPs de bacterias descriptas hasta el presente) mostró una única banda a 22 kda. Estos resultados sugieren que el movimiento de agua en bacterias lácticas podría deberse a la presencia de una AQP con elevada homología a la AQP1. Los resultados hallados a nivel funcional concuerdan hasta el momento con los encontrados a nivel molecular. Se realizarán estudios de clonado y secuenciación de la proteína de 22 kda para determinar si corresponde o no a una AQP.