Estudio del efecto protector de un simbiotico (bacterias lácticas + galacto-oligosacaridos) y zinc sobre la acción de E. coli enterohemorragica en células Vero.

GERBINO, E.; TYMCZYSZYN E,; GOMEZ ZAVAGLIA, A.; HUGO A.

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2015

Asociación Argentina de Tecnologos de Alimentos

Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) está asociada a brotes de diarrea, colitishemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Numerosos factores devirulencia han sido caracterizados en las cepas de EHEC siendo muy importantela toxina Shiga. En este sentido los probióticos son bien conocidos por suimpacto positivo en la salud intestinal, la estimulación de la respuestainmunitaria y la protección contra patógenos como EHEC. Dado que tanto el zinccomo los probióticos tienen efectos beneficiosos sobre el estado nutricional e inmunológicodel huésped, su efecto conjunto podría ser amplificado.Los prebióticos han sido definidos como ingredientesalimenticios no digeribles que estimulan selectivamente la proliferación y/oactividad de poblaciones bacterianas benéficas del tracto gastrointestinal delhuésped. Entre los compuestos con propiedades prebióticas, losgalactooligosacáridos (GOS) son los que muestran mayores resultados.Algunos trabajos se centran en el uso de probióticos yzinc o prebióticos y zinc como opciones terapéuticas para la diarrea o incluso elHIV. Sin embargo, en ninguno de los casos se estudió el efecto combinado delzinc con una mezcla simbiótica de probióticos y prebióticos. Es por todo lomencionado, que el objetivo general del presente trabajo fue evaluar laspropiedades biológicas de un simbiótico (bacterias lácticas ygalactooligosacaridos) y zinc frente a EHEC in vitro. Las bacterias lácticas L. plantarum CIDCA 83114 y L.kefir CIDCA 8348 fueron crecidas en caldo MRS a 37 y 30 °C respectivamente, durante 48 hs. Escherichia coli 69160 (EHEC) secultivó en caldo TSB durante 16 hs. a 37 °C y sus sobrenadantes se obtuvieron previa centrifugación(6000 rpm, 10 min.) mediante  filtración  con membrana de  0.45 mm.  Los GOS VIVINAL SYRUP que contiene un 59 % (p/v) de GOS se emplearon en una concentración del  2% (p/v) ysoluciones de sulfato de zinc 1 mM. Se  utilizaroncélulas Vero como modelo de citotoxicidad de toxina Shiga. Las mismas secrecieron hasta confluencia en medio DMEM a 37ºC en atmósfera con 5% de CO2.Las monocapas fueron preincubadas durante una hora con distintas combinacionesde bacterias lácticas, GOS y Zn. Luego se añadió el sobrenadante del cultivo deEHEC y se incubó durante 48h. El efecto biológico dela toxina Shiga se  evaluó mediantedesprendimiento celular por tinción con cristal violeta y liberación de laenzima lactato deshidrogenasa (LDH). Se determinó que la concentración de toxina óptima paraevaluar un efecto protector osciló entre 1/500 y 1/1000 con un desprendimientocelular entre un  82 y 34 %respectivamente. Al preincubarse las monocapas con GOS el desprendimientocelular disminuyo un 10 % respecto a la toxina. En el caso de las distintascombinaciones de L. plantarum 83114 y L. kefir 8348 con GOS, seobservó que la mezcla de bacteria + GOS produjo un 40 % menos dedesprendimiento celular. El agregado de zinc al simbiótico no modificosignificativamente los porcentajes de desprendimiento observados en la mezclabacteria con GOS. Los valores obtenidos a través de la enzima lactatodeshidrogenasa se correlacionaron con los de cristal violeta.Los resultados de este trabajo muestran un efectosinérgico protector de la mezcla simbiótico con zinc frente a la acción de latoxina Shiga E. coli enterohemorrágica a diferencia de cada una de ellaspor separado.