Péptidos antimicrobianos intestinales: su efecto sobre diferentes microorganismos

HUGO, A. A.; DE ANTONI G.L Y PÉREZ P.F

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología.X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Los péptidos antimicrobianos constituyen un importante mecanismo de defensa de las mucosas. Su efecto antibacteriano se atribuye a la formación de poros en las membranas celulares procarióticas y se han descripto diferentes moléculas con estas propiedades. Las células epiteliales colónicas producen dos tipos de péptidos catiónicos: las ß defensinas (hBD 1 y hBD 2) y la catelicidina LL37/ hCAP 18. Bacterias de los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium se emplean en formulaciones probióticas. Entre las características deseadas para las bacterias probióticas se encuentra su capacidad de interaccionar con las células del hospedador dando una respuesta favorable. Numerosos estudios mostraron que los microorganismos probióticos se relacionan de una manera particular con las células del hospedador. En este contexto, el objetivo del presente trabajo fue el estudio de la sensibilidad de diferentes microrganismos, incluyendo algunos potencialmente probióticos, frente a factores antimicrobianos extraídos de las células de epitelio colónico humano (línea Caco-2) y de defensinas purificadas. Lactobacilos y bifidobacterias se cultivaron en caldo MRS (37°C). Las otras bacterias en caldo nutritivo (37°C). Los extractos citosólicos crudos de células Caco-2 se obtuvieron por sonicación y ultracentrifugación. Los extractos catiónicos se obtuvieron mediante extracción con resina de intercambio catiónico débil. Se concentró por liofilización. Las ß defensinas purificadas fueron de origen commercial (Sigma, hBD 1 y hBD 2). Los ensayos de inhibición en medio sólido se realizaron sobre una pátina de microorganismos en el medio correspondiente suplementado con 1% de agarosa. Las cinéticas de crecimiento en medio líquido se efectuaron mediante medidas de densidad óptica a 600 nm. En medio sólido, tanto el extracto citosólico crudo como el catiónico concentrado de las células Caco-2 produjeron un halo de inhibición semejante frente a distintos microorganismos Gram (-) y (+) como Escherichia coli CM1 , Salmonella no typhi , Salmonella arizonae, Shigella flexneri y Bacillus cereus M2. Las cepas de lactobacilos y bifidobacterias ensayadas no fueron inhibidas, a excepción de la cepa LBB (Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus). En medio líquido, las beta defensinas humanas (2.5 ug /ml) no inhibieron el crecimiento de E.coli CM1, Bacillus cereus M2 y de la cepa CIDCA 133 (Lactobacillus delbrueckii subsp lactis). La cepa LBB mostró una mayor sensibilidad a la defensina hBD2. Los resultados muestran diferencias en la sensibilidad de las cepas estudiadas frente a extractos citosólicos de enterocitos y defensinas purificadas. Resulta muy interesante la existenca de lactobacilos con diferente sensibilidad a defensinas y extractos catiónicos. Estas diferencias podrían ser relevantes en la relación entre el hospedador y los microorganismos intestinales.