Estudio de la esporulación y sensibilidad a factores luminales intestinales en Clostridium difficile.

SOLDAVINI PELICHOTTI, P. C.; TREJO, F. M. Y PÉREZ, P. F.

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC).; 2018

Clostridium difficile es un patógeno anaerobio estricto esporulado que se establece y desarrolla en el colon del hospedador provocando desde diarreas hasta colitis pseudomembranosa asociadas principalmente a las toxinas A y B producidas por las células vegetativas. Las esporas son su forma de diseminación y contagio. Una vez en el hospedador, C. difficile se encuentra con factores luminales tales como sales biliares, cuyo efecto sobre la bacteria es determinante en el ciclo de infección. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el crecimiento y la esporulación de C. difficile en presencia de ácido ursodeoxicólico (UDCA) y bilis de buey.Se evaluaron tres aislamientos clínicos locales: ALCD3, GCD2 y GCD4 y la cepa de referencia VPI 10463. Efecto de sales biliares: C. difficile fue inoculado en medio BHI en presencia o no de diferentes concentraciones de bilis o UDCA e incubadas en anaerobiosis a 37°C. El desarrollo de los cultivos se evaluó por medida de DO (600nm) a las 22 h. Esporulación: se evaluó por microscopia óptica a partir de cultivos de C. difficile en DCM a diferentes tiempos de crecimiento, observándose esporos oscuro (O), brillantes (B) y libres (L). El resultado se expresó como relación (R) de forma evaluada/formas totales (ej. RO para esporos oscuros). Termorresistencia por recuento en DCM-agar-tauroclato de sodio (0.1% p/v), de suspensiones bacterianas sin tratar y tratadas térmicamente (20 minutos a 65ºC). El resultado se expresó como TR: relación formas termo-resistentes/formas totales. El crecimiento de C. difficile (DO a 22 h de incubación) fue inhibido significativamente respecto al control, en un 36% (ALCD3 y GCD2), 65% (VPI 10463) y 92% (GCD4) en presencia de UDCA 1 mM. Para todas las cepas la inhibición fluctuó entre 90-95% con UDCA 4 mM. En presencia de bilis, al 0.1% p/v, el crecimiento fue inhibido significativamente respecto al control en un 56% (ALCD3) y 60% (GCD2). A la concentración máxima evaluada, 2% p/v, la inhibición fue de 38% (ALCD3) y 96% (GCD2).Las cepas mostraron tener parámetros de crecimiento similares entre sí, con tiempos de duplicación de 1 h y latencia entre 1 y 4 h, llegando a fase estacionaria entre las 10-12 h. A 24 h de crecimiento se detectaron formas esporuladas en estadíos tempranos (O) con RO: 0,25 (VPI 10463), 0,70 (ALCD3) y 0,83 (GCD4). La cepa ALCD3 además presentó formas brillantes RB: 0,25. A los 7 días, se detectaron RL: 0,02 (VPI 10463), RL: 0,80 (ALCD3), RL: 0,79 (GCD2) y RL:0,14 (GCD4). Luego de 24 h de crecimiento se observaron diferencias en TR, con valores de 0,27 (ALCD3), 0,07 (GCD4),