Activación de la vía de MAPKS (ERK 1/2 ) en células eucarióticas en cultivo: Efecto de Giardia intestinalis.

HUMEN, M. A. Y PÉREZ, P. F.

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

<i>Giardia intestinalis</i> es agente etiológico de diarreas en todo el mundo. La asociación entre el parásito y el epitelio intestinal inicia varios cambios como acortamiento de las microvellosidades y alteración del citoesqueleto de enterocitos. Las proteín-kinasas activadas por mitógenos (MapKs) son componentes clave en la señalización y median la respuesta celular ante numerosos estímulos. Una vez activadas,  fosforilan proteínas y factores de transcripción y regulan distintos procesos celulares. Este trabajo tuvo como objetivo la puesta a punto de un sistema para el estudio de la activación de las MapKs (ERK 1/2) en células eucarióticas por infección con <i>G. intestinalis</i>. Se usaron enterocitos humanos (Caco-2), células epiteliales de laringe (Hep-2) y fibroblastos de riñón de mono (Vero) durante 15, 30, 60 y 120 min con insulina, sorbitol, miristato-acetato de forbol (PMA) y suero fetal bovino (SFB). Para estudiar el efecto de <i>G. intestinalis</i> se infectaron células Caco-2 con 3 dosis de trofozoitos (cepa H7), usando sorbitol como control de activación. Por inmunoblotting se determinó la relación p-ERK/ ERK total  para cada una de las condiciones. Se comparó con controles sin estimular. La activación de ERK 1/2 dependió de la línea celular y del tiempo de incubación. El sorbitol fue buen activador de las células Caco-2 a 15 y 30 minutos de incubación, pero sólo activó las células Hep-2 a los 15 minutos. El PMA y la insulina no activaron las MapKS en Caco-2 pero sí en Hep-2. Con SFB no se obtuvo estimulación. La presencia de trofozoitos produjo un efecto proteolítico debido a las proteasas de <i>Giardia</i> durante el lisado celular. Estas proteasas  son capaces de atacar las proteínas ERK 1/2 , siendo ERK-2 más susceptible. Esto se evitó despegando los trofozoitos antes de la obtención de los extractos y utilizando Iodoacetamida (inhibe cisteín-proteasas). Los trofozoitos de <i>G. intestinalis</i> son capaces de estimular la vía de las MapKs en células Caco-2. La mayor activación se obtuvo con concentraciones intermedias. El estado de activación de la célula varía notoriamente con el tiempo de incubación, y es diferente para cada línea celular. <i>G. intestinalis</i> señaliza a través de la cascada de las MapKs, con lo cual los procesos fisiopatológicos asociados a la giardiasis no se deberían meramente a la acción mecánica de la adhesión, sino que hay un disparador más específico de eventos celulares desencadenados por esta interacción. La acción de las proteasas de <i>Giardia</i> sobre ERK2 plantea un interrogante acerca de su posible rol durante la infección.